三氧化二砷对类风湿性关节炎滑膜细胞凋亡影响的体外研究

【摘要】：目的:类风湿性关节炎(RA)、正常人(NC)滑膜细胞体外原代培养,并且定量分析三氧化二砷(arsenic trioxide,AS_2O_3)对滑膜细胞凋亡的诱导作用以及探讨其作用可能发生的机制,进而探讨AS_2O_3在治疗类风湿关节炎中的价值。 方法:双酶消化法体外培养人关节滑膜细胞,本试验采用3～12代滑膜细胞;采用光镜、流式细胞术、比色法、MTT等手段对培养的滑膜细胞进行分析鉴定;其中MTT法检测不同浓度AS_2O_3对5例RA和3例NC作用48小时后对滑膜细胞活力的影响;流式细胞术定量检测不同浓度AS_2O_3对5例RA和3例NC作用48小时后细胞发生凋亡的百分率;比色法检测不同浓度的AS_2O_3作用48小时后滑膜细胞裂解液中CASPASE-3活性的变化,探讨AS_2O_3诱导凋亡作用发生的可能机制,及其作用环节;并用SPSS 13.0统计软件对结果进行分析。 结果:1.MTT法显示不同浓度的AS_2O_3作用48小时后,能够抑制滑膜细胞增殖,且在10-80 μ mol/l浓度范围内其作用成一定的剂量依赖性。 2.流式细胞仪检测发现正常情况下,RA、NC滑膜细胞凋亡有显著差异,RANC.不同浓度的AS_2O_3作用48小时后,滑膜细胞发生不同比率的凋亡,并且在10-80 μ mol/l浓度范围内其作用呈一定剂量依赖性。 3.比色法检测发现不同浓度的AS_2O_3作用48小时后滑膜细胞裂解液中CASPASE-3的活性显著增强,并且在10-80 μ mol/l浓度范围内其作用呈一定剂量依赖性。