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糖尿病大鼠视网膜VEGF、PEDF表达与神经细胞及血—视网膜屏障损伤的研究

李艳  
【摘要】:糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病致盲的主要原因,对于其发病机制及相应治疗方案的研究已成为热点。目前有研究表明眼内血管生成刺激因子与抑制因子的失衡是增殖性糖尿病视网膜病变发生的主要原因,热点主要集中于血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和色素上皮源性因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)两种拮抗性因子,然而此两种因子是否也在早期病变中发挥重要作用有待于进一步研究。 目的 本研究拟以链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠为研究对象,检测VEGF和PEDF在糖尿病大鼠视网膜中的动态表达,同时观察大鼠神经视网膜及血—视网膜屏障病理改变的发生,探讨非增殖期及临床前期糖尿病视网膜微血管病变及神经退行性病变的病理机制以及两种生长因子可能发挥的作用。 方法 选取130只健康SD大鼠,尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。根据饲养时间,随机分为正常对照0.5月组(N0.5)、糖尿病0.5月组(DM0.5)、正常对照1月组(N1)、糖尿病1月组(DMI)、正常对照3月组(N3)、糖尿病3月组(DM3)、正常对照5月组(N5)及糖尿病5月组(DM5)。分别行RT-PCR、Western Blot及免疫组织化学染色等实验方法,从mRNA及蛋白水平检测大鼠视网膜VEGF、PEDF的表达丰度及部位。同时应用免疫组化、TUNEL染色、透射电镜及伊文思蓝血管通透性检测法等方法从多个观察角度定位、定性或定量糖尿病时视网膜神经退行性改变及血—视网膜屏障的破坏情况。 结果 STZ诱导的糖尿病大鼠高血糖状态持久稳定,表现为明显的“三多一少”典型症状。 正常对照组大鼠视网膜有VEGF mRNA及蛋白的表达,DM0.5组表达开始增高(P0.05),随病程延长,表达量逐渐增高,至DM5组视网膜VEGF表达


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