沙眼衣原体E型DNA疫苗的构建及其免疫效果的研究

【摘要】：沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, C. t)所致的泌尿生殖道感染近几年迅速增多,无症状和慢性C.t感染所致的前列腺炎、不孕不育、异位妊娠、慢性盆腔炎等严重危害着患者的身心健康。目前,C.t泌尿生殖道感染的迁延难治、易于复发和耗资巨大已成为共识,对C.t感染的研究已成为当今国内外研究的热点之一,C.t的预防和控制方法亟待改进。沙眼衣原体疫苗的研究便是预防措施中的重点之一。在众多研究的C.t疫苗中,DNA疫苗凭借其不可比拟的优势成为发展的方向。遗憾的是到目前为止仍然没有成功的疫苗问世。 目的:构建感染泌尿生殖道的C.t优势型—E型的DNA疫苗,并选择小鼠白细胞介素2(mouse interleukin-2,mIL-2)真核表达质粒作为免疫佐剂,研究DNA疫苗单独免疫及联合佐剂共同免疫在小鼠体内诱发的免疫应答和免疫保护作用。 方法:C.t E型经细胞培养后提取染色体DNA作为模板,设计引物扩增出完整的ompl基因,并将该基因定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中构建重组质粒(即DNA疫苗),鉴定后脂质体法转染重组质粒至HeLa细胞中表达。以BALB/c小鼠为实验动物,采用肌肉接种免疫的方式,将小鼠分为接种空质粒的阴性对照组、DNA疫苗单独免疫组、DNA疫苗联合mIL-2基因佐剂免疫组和接种灭活C.t E型原体的阳性对照组。通过血清和生殖道局部抗体检测、细胞因子检测、抗体中和试验、迟发型超敏反应、脾淋巴细胞增殖试验、实验动物经生殖道途径进行C.t E型攻击后的C.t清除情况以及局部组织病理形态学变化的观察来研究所构建的C.t E型DNA疫苗的免疫效应和mIL-2基因佐剂的免疫增效作用。