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BcL-2过度表达抑制妊娠期糖尿病脐静脉平滑肌细胞的凋亡

常颖  
【摘要】: 目的糖尿病是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合征,是较常见的内分泌代谢障碍性疾病。随着生活水平的提高和工业化的快速发展,糖尿病的发病率也在逐年升高。而在糖尿病人群中发生冠心病、失明,肢端坏死等严重并发症均明显高于非糖尿病人群。妊娠期糖尿病(GDM)指妊娠期发生或发现的糖尿病。1979年,WHO将GDM列为糖尿病的一个独立类型。GDM对孕妇、胎儿、新生儿有诸多影响。 糖尿病病人极易发生各种血管病变,如血管内中膜(intima—media thickness,IMT)增厚、动脉硬化等。目前对于糖尿病血管并发症的研究大多集中在高糖对细胞增殖的影响,一般认为,糖尿病患者血管病变的重要表现是细胞增殖增加。然而,新的证据表明细胞的增殖与凋亡的平衡关系受到干扰对糖尿病血管病变的发生更为重要,即血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与凋亡的平衡受到扰动是糖尿病血管病变的重要机制之一,同时影响着血管重建及血管损伤。本研究发现GDM患者脐静脉血管壁IMT较NP患者相比显著增厚。而IMT增厚是动脉硬化早期的形态学改变,因而,脐静脉IMT增厚必然对脐静脉循环及物质交换产生影响,也因此可能影响胎盘血流灌注,从而对新生儿产生影响。出现IMT增厚的原因可能为:一是VSMC增殖增加和/或凋亡减少,二是血管中层蛋白基质含量增加。基于此,我们设计了本实验,试图通过以上实验及其扩展研究,找到GDM患者脐静脉血管壁IMT增厚的原因及其对胎盘血流灌注和新生儿的影响,为ODM的靶向治疗提供一定的理论依据。 材料与方法 研究对象共60例,其中GDM 30例,同时选取与GDM同期入院、同年龄组的健康孕妇30例(经口服50g葡萄糖筛查无GDM倾向者)作为对照组。剖宫产时胎盘娩出后立即在距脐带插入胎盘3cm处离断脐带,由被离断脐带中段切取4cm,放入无菌培养皿中。在无菌环境中迅速取出脐带,并置于4℃预冷的Hanks液中,予以细胞培养。同时另取一段脐带中段置 于4%中性甲醛中固定,行HE染色及VG染色。 实验方法包括:1.对GDM及NP患者脐静脉的VSMC进行体外培养,以MTT法检测它们的增殖数量;2.利用Transwell小室检测各研究对象VSMC的体外迁移能力;3.VG染色检测血管壁中层胶原纤维含量;4.流式细胞仪检测经Annexin V/PI双染的VSMC凋亡率;5.以RT-PCR法、Real-time PCR法及Western blotting检测抗凋亡蛋白Bcl-2在各研究对象的VSMC中的表达。 结果 1.同NP组相比,GDM患者脐静脉血管壁IMT显著增厚(187.56±2.62μm VS 102.45±1.2bμm)。 2.同NP组相比,GDM组患者脐静脉VSMC体外迁移能力增强(162.6±3.58 VS 50.6±3.51)。NP组VSMC经高糖培养后其增殖能力及体外迁移能力与GDM患者相似。 3.GDM组与NP组脐静脉血管壁中层胶原纤维含量无明显差别。 4.同NP组相比,GDM组VSMC中Bcl-2的RNA及蛋白表达增强。NP组VSMC经高糖培养后Bcl-2的RNA及蛋白表达增强,与GDM组相似。 5.同NP组相比,GDM组VSMC凋亡减少。NP组VSMC经高糖培养后细胞凋亡减少。 结论 1.GDM患者脐静脉血管壁IMT增厚,说明GDM患者脐静脉已具有动脉硬化早期的形态学改变。 2.高糖导致Bcl-2表达增加,从而使GDM患者VSMC凋亡减少,VSMC数量增加及迁移过度,从而在血管内中膜沉积增多,导致GDM患者发生血管病变。


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