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沙眼衣原体E型DNA疫苗免疫效应的研究

王敬  
【摘要】: 沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, C.t)所致的非淋球菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis, NGU)是最常见的性传播疾病(STD, sexually transmitted diseases)。其感染所引起的的前列腺炎、不孕不育、异位妊娠、慢性盆腔炎等严重危害着患者的身心健康。对C.t感染的研究已成为当今国内外研究的热点之一,C.t的预防和控制方法亟待改进。沙眼衣原体疫苗的研究便是预防措施中的重点之一。在众多研究的C.t疫苗中,DNA疫苗凭借其不可比拟的优势成为发展的方向。遗憾的是到目前为止仍然没有成功的疫苗问世。 目的:研究感染泌尿生殖道的C.t优势型—E型的DNA疫苗在小鼠体内诱发的免疫应答和免疫保护作用。 方法:本研究以沙眼衣原体(C.t)细胞培养技术为基础,将C.t E血清型在McCoy细胞中培养,并经过连续传代使C.t增量。以4~5周龄BALB/c小鼠为实验动物,将小鼠分为接种空质粒的阴性对照组、DNA疫苗单独免疫组和接种灭活C.t E型原体的阳性对照组。分别于第0、2、4周双侧股四头肌肌肉接种,实验组接种本实验室所构建的DNA疫苗免疫,阴性对照组小鼠接种空质粒,阳性对照组接种灭活C.t E型原体同时辅以完全弗氏佐剂与不完全弗氏佐剂。第6周采集小鼠血清和生殖道分泌物冲洗液以检测血清和局部C.t特异性抗体、细胞因子、抗体中和试验;同时对部分小鼠进行迟发型超敏反应实验并处死采集其脾脏以完成脾淋巴细胞增殖试验。剩余部分右股部肌肉注射黄体酮以增强小鼠对C.t感染的敏感性。第7周用C.t E型原体从生殖道感染小鼠。第8周采集小鼠生殖道脱落细胞并进行小鼠生殖道C.t的免疫荧光检测与培养和计数。第9周取小鼠静脉血、生殖道分泌物冲洗液、脾淋巴细胞和小鼠完整子宫标本,检测其抗体、细胞因子、脾淋巴细胞增殖情况及宫颈组织病理,从而研究所构建的C.t E型DNA疫苗的免疫效应。 结果:(1) C.t E型株成功培养并定量,结果显示,所有的孔板90%以上细胞感染,收集6孔板的C.t悬液,高速离心后得到的C.t EB悬液其浓度为2.1750×10~7IFU/ml IFU/mL,考马斯亮蓝法进行C.t EB蛋白定量显示蛋白浓度为3081.74μg/ml。(2)生殖道C.t EB的攻击前后,检测血清抗体、细胞因子IFN-γ、抗体中和试验、小鼠进行迟发型超敏反应及脾淋巴细胞增殖试验示所构建的C.t E型DNA疫苗单独免疫小鼠能够诱导产生一定的C.t特异性细胞免疫和体液免疫。(3)生殖道分泌物衣原体免疫荧光测定、小鼠生殖道C.t培养和计数、组织病理活检示阴性对照组小鼠感染C.t,而阳性对照组与实验组未感染。 结论:(1)所构建的C.t E型DNA疫苗单独免疫小鼠能够诱导产生一定的C.t特异性细胞免疫和体液免疫。(2)实验动物针对C.t omp1基因所编码的主要外膜蛋白(major outer membrane protein, MOMP)产生的抗体是保护性抗体,具有中和能力。(3)构建的C.t E型DNA疫苗能够在实验小鼠体内发挥一定的免疫保护作用。


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