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委陵菜抗糖尿病有效成分鉴定及其提取分离工艺研究

赵川  
【摘要】: 中药委陵菜又名翻白菜,白头翁,蛤蟆草,天青地白,为蔷薇科(Rosaceae)植物委陵菜Potentilla chinesis Ser.的全草,《中国药典》2000,2005年版收载。委陵菜性寒,味苦,具有清热解毒,凉血止痢的作用。常用于赤痢腹痛、久痢不止、痔疮出血、痈肿疮毒等。经临床应用调查,在天津蓟县中医医院和天津中医药大学附属医院应用于治疗糖尿病,取得了较好的疗效。 本文的第一部分研究委陵菜抗糖尿病有效成分。将委陵菜的95%乙醇提取物用不同极性的溶剂萃取得到各提取部位,以四氧嘧啶糖尿病小鼠模型考察各部位的抗糖尿病作用。实验结果表明,委陵菜F部位降低四氧嘧啶小鼠模型血糖的作用最强,与阳性对照组在给药后无显著性差异(p>0.01),血糖降低率分别为32.97%和33.30%,说明委陵菜F部位具有较强的抗糖尿病作用。将F部位继续分离纯化,得到一化合物,经有机波谱鉴定为委陵菜黄酮。委陵菜黄酮的药理实验表明剂量组1(0.4 mg/kg)血糖降低率52.19%,盐酸苯乙双胍阳性对照药组血糖降低率为29.26%,说明该黄酮类化合物具有明显的降低四氧嘧啶小鼠模型血糖的作用,药效强于盐酸苯乙双胍,是很有应用开发前途的候选一类新药。 第二部分研究候选新药一委陵菜黄酮的提取分离工艺。选用不同浓度的乙醇加热回流提取,进行单因素考察及正交试验,考察加热回流时间、提取乙醇浓度、倍量、次数、料液比对提取的影响,并最终确定最佳提取工艺为60%乙醇,按溶液体积(L)∶药材重量(kg)为10-6-6的液料比例提取三次,每次1.5小时。在此条件下提取物的委陵菜黄酮含量为2.7‰,委陵菜黄酮提取率76.7%。 在委陵菜黄酮单体的分离工艺研究中,比较了两种大孔吸附树脂(AB-8与D101型)和聚酰胺对委陵菜60%乙醇提取物中委陵菜黄酮的分离效果,实验选定AB-8树脂进行分离,考察了AB-8树脂柱的洗脱,吸附流速,上样量,径高比等因素,建立了委陵菜黄酮的初步分离工艺,分离条件为:委陵菜60%提取物流浸膏,以药材(kg)∶30%乙醇(L)4.5∶10溶解,4000 r/min离心15min,径高比为1∶3的AB-8树脂柱,柱体积10倍量上样液上样,吸附流速为每小时2倍量柱体积。3倍量30%乙醇,5倍量60%乙醇,4倍量95%乙醇以每小时2倍量柱体积的流速洗脱,收集60%乙醇洗脱部分。得到委陵菜黄酮分离组分,其含量为3.8-4.0%,达到了初步分离目的。在进一步分离纯化AB-8树脂柱洗脱组分的研究中,比较AB-8和聚酰胺的进一步纯化效果,实验选择聚酰胺进行委陵菜黄酮的纯化。实验结果表明纯化效果从4%到27%,委陵菜黄酮的含量提高了约6-7倍。


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