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肿瘤坏死因子-α对脂肪细胞脂联素和炎症因子mRNA表达的影响

曹竞文  
【摘要】: [目的]大量研究发现肥胖患者和2型糖尿病(T2DM)人群血浆中TNF-α水平明显升高,因此肥胖和2型糖尿病被认为是一种慢性低度的炎症状态。过度表达的TNF-α在胰岛素抵抗中被认为发挥了中心介质的作用,但是其导致胰岛素抵抗的分子机制目前尚不清楚。本研究利用高浓度肿瘤坏死因子(TNF-α)处理3T3-L1脂肪细胞系,模拟低度的炎症状态下的脂肪细胞,观察成熟3T3-L1脂肪细胞的脂联素(ADPN)mRNA.过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)mRNA、TNF-αmRNA、白细胞介素-6(IL-6)mRNA和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达的变化,探讨TNF-α在炎症-胰岛素抵抗(IR)-2型糖尿病(T2DM)过程中的作用。 [方法] (1)培养前脂肪细胞3T3-L1细胞,并观察其诱导分化成熟过程中过氧化物酶体增殖活化受体-γ(PPAR-γ)mRNA、脂联素(ADPN)mRNA的表达情况。 (2)以高浓度(20μg/L)的TNF-α处理分化成熟的脂肪细胞0.5、4、8、24 h,提取总RNA,采用实时定量逆转录聚合酶链反应检测ADPN mRNA. PPAR-γmRNA.TNF-αmRNA.白细胞介素(IL)-6 mRNA.IL-1βmRNA的表达情况。 [结果] (1)3T3-L1细胞诱导分化过程中ADPN mRNA的表达呈逐渐上升趋势,诱导后PPAR-γmRNA增加。 (2)以高浓度TNF-α处理0.5 h后PPAR-γmRNA表达水平并未出现明显下降,4、8、24 h时均低于对照组(P0.01),4 h时降至最低。分化成熟的脂肪细胞中ADPN mRNA表达水平在TNF-α处理0.5、4、8 h后随着时间延长逐渐下降,8 h时降至最低(P0.01)。TNF-α处理0.5 h后TNF-αmRNA表达水平明显上升,并于4 h时达峰值,各处理组均高于对照组(P0.01);0.5 h后IL-6 mRNA表达水平明显升高,各处理组均高于对照组(P0.01)。空白组、对照组和各TNF-α处理组IL-1βmRNA的表达差异无统计学意义(P0.05)。 [结论]前脂肪细胞3T3-L1细胞系在诱导成熟过程中,PPAR-γmRNA和ADPN mRNA表达水平随着诱导过程逐渐升高;TNF-α处理可以使成熟脂肪细胞炎症因子TNF-αmRNA和IL-6 mRNA表达水平升高;TNF-α处理可以使成熟脂肪细胞PPAR-γmRNA和ADPN mRNA表达水平下降,并呈时间依赖性。本实验从分子生物学水平研究2型糖尿病的炎症假说,TNF-α参与了炎症-IR-T2DM的过程。


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