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大血藤中绿原酸成分及总皂苷对腹膜粘连的机制研究

周静  
【摘要】:目的:从凉血活血方君药大血藤的抑菌药效成分入手,通过体外抑菌、动物体内实验及细胞因子的测定,探讨大血藤药效成分对细菌性腹膜炎的多靶点作用,以研究大血藤中绿原酸成分及总皂苷对腹膜粘连的作用机制。 方法:(1)用70%乙醇加热回流提取,大孔吸附树脂分离纯化得到大血藤的绿原酸和总皂苷药效成分,再应用高效液相色谱法及紫外分光光度法分别测定大血藤中绿原酸和总皂苷含量。(2)选择大肠埃希菌、肺炎克雷白菌、铜绿假单孢菌、粪肠球菌的标准株和临床株作为实验菌株,以琼脂二倍稀释法统计大血藤及所提药效成分的最小抑菌浓度(MIC)评价其体外抑菌效果;(3)采用盲肠结扎加穿孔法(CLP)制作大鼠细菌性腹膜炎动物模型,观察体温,体重等变化及第14天的腹腔粘连程度;用激光多普勒微循环血流仪测定大鼠小肠组织微循环血流量和小肠肠系膜前动脉血流量,并比较大血藤治疗后的组织器官血液灌流变化;取腹膜粘连组织以紫外分光光度法测定粘连组织的羟脯氨酸,再以ELISA法分别测定TNF-α、TGF-β1、MMP-1、TIMP-1、ICAM-1和VEGF的含量。 结果:(1)测定大血藤中的绿原酸和总皂苷(以人参皂苷计)含量分别为0.17%,0.13%。(2)大血藤所提药效成分及单味药水煎剂对大肠埃希菌、肺炎克雷白菌、铜绿假单孢菌以及粪肠球菌的标准株、临床株均有抑菌效果,其中对粪肠球菌的标准株和临床株的抑菌作用最强,并发现其药效成分的抑菌效果优于水煎剂。另外,大血藤与牡丹皮二者的药效成分合用时,对铜绿假单胞菌和粪肠球菌表现为部分协同作用,与赤芍二者的药效成分合用时,对所试菌株均显现无关作用。(3)成功建立了细菌性腹膜炎动物模型,该模型手术易于操作,重复性好,死亡率低,适于本实验研究。(4)药效成分绿原酸和总皂苷能在一定程度上改善大鼠小肠组织微循环血流量,提高组织器官的血流灌注,并能降低粘连组织中羟脯氨酸水平,降低TNF-α、TGF-β1、TIMP-1、VEGF和ICAM-1等细胞因子的表达水平,提高基质金属蛋白酶MMP-1的表达水平,进而减少粘连的形成。 结论:大血藤绿原酸成分及总皂苷对大肠埃希菌、肺炎克雷白菌、铜绿假单孢菌以及粪肠球菌的标准株、临床株具有确切的抑菌作用,在明确了其抑菌作用物质基础后从整体及细胞水平分别验证其对细菌性腹膜炎的多靶点作用,能有效的抑制腹膜粘连的发生发展。


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