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下丘脑室旁核-垂体-甲状腺胃动素的表达、调控及对胃运动的影响研究

郭菲菲  
【摘要】:目的: 观察胃动素(MTL)在下丘脑室旁核(PVN)、垂体及甲状腺的表达,比较甲状腺与小肠MTL mRNA基因序列的异同;探讨MTL活性肽及其前体mRNA在甲状腺良、恶性肿瘤组织中表达的差异及临床意义; 探讨下丘脑PVN-垂体-甲状腺对甲状腺胃动素分泌及胃运动的调控,以及甲状腺胃动素对下丘脑PVN、垂体MTL表达的反馈调控; 研究人甲状腺髓样癌(TT)细胞MTL的表达、分泌和调控,阐明MTL在TT细胞增殖、侵袭和转移中的作用和临床意义。 方法: 1.采用荧光免疫组化技术,观察下丘脑PVN、垂体及甲状腺内MTL的定位和定性表达;采用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)、Southern Blot和分子克隆、荧光免疫组化双染等技术,观察人甲状腺和小肠MTL前体mRNA基因序列异同;比较MTL前体mRNA和蛋白在正常甲状腺和甲状腺良、恶性肿瘤组织中表达的异同。 2.采用在体胃运动和放射免疫方法,观察刺激/损毁下丘脑PVN、摘除垂体或甲状腺大鼠胃窦移行性复合运动(MMC)Ⅲ期变化及血浆三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)和MTL含量的改变;采用Real-time PCR法,观察电刺激/损毁下丘脑PVN及摘除甲状腺对下丘脑-垂体-甲状腺MTL前体mRNA表达的影响;采用免疫组化法,观察刺激/损毁下丘脑PVN对甲状腺MTL表达的改变,及甲状腺摘除对PVN内c-Fos表达的影响。 3.采用Southern blot、Western blot和荧光免疫细胞化学技术检测TT细胞内MTLmRNA和蛋白表达,应用Small interfering (siRNA)技术、MTT实验、Transwell实验和划痕实验分析MTL基因表达对TT细胞增殖、侵袭和转移能力的影响。 结果: 1.大鼠下丘脑PVN、垂体、甲状腺及人垂体、甲状腺组织均可见MTL免疫阳性细胞的表达,且在甲状腺MTL与降钙素(CT)共表达于同一细胞,即甲状腺C细胞。 2.人甲状腺MTL前体mRNA基因序列与基因库报道的人小肠MTL前体mRNA基因序列(BC112314,NCBI,美国)相同。 3.正常人甲状腺和甲状腺肿瘤组织内均有MTL和MTL前体mRNA的表达,其中甲状腺髓样癌MTL及其前体mRNA的表达显著高于正常甲状腺、甲状腺乳头状癌、滤泡癌、嗜酸性腺瘤及结节性甲状腺肿(P0.01);而甲状腺乳头状癌和滤泡癌MTL及其前体mRNA的表达明显低于正常甲状腺、嗜酸性腺瘤及结节性甲状腺肿(P0.05);结节性甲状腺肿和嗜酸性腺瘤与正常甲状腺相比,MTL及其前体mRNA的表达无显著差异(P0.05)。 4.下丘脑PVN对胃动素分泌及胃运动的影响结果显示,电刺激下丘脑PVN可使大鼠血浆和甲状腺MTL含量显著增高(P0.05),垂体和甲状腺MTL前体mRNA表达显著增加(P0.05),胃窦MMCⅢ期样收缩明显增强(P0.05),该作用可部分被MTL受体拮抗剂GM-109阻断(P0.05);而电刺激甲状腺摘除的大鼠PVN,与甲状腺摘除假手术组相比,其血浆MTL含量显著降低(P0.05),胃窦MMCⅢ期样收缩明显减弱(P0.05)。电损毁PVN后,大鼠血浆和甲状腺内MTL含量显著降低(P0.05),甲状腺和垂体内MTL前体mRNA表达显著降低(P0.05),胃窦MMCⅢ期样收缩明显减弱(P0.05)。 5.垂体对胃运动的影响研究结果显示,在垂体摘除大鼠,MMCⅢ期收缩频率显著减慢(P0.05),PVN注射MTL,与垂体摘除+PVN注射NS组比较,MMC的收缩频率显著增加(P0.01),但与假手术垂体摘除+PVN注射MTL组比较,MMCⅢ期收缩频率显著降低(P0.05)。 6.甲状腺对胃动素的分泌、胃运动的影响以及对下丘脑PVN、垂体MTL表达的反馈调控研究显示,甲状腺摘除后,大鼠血浆MTL含量显著减少(2d,P0.01;4d,P0.05),下丘脑和垂体MTLmRNA表达显著增加(2d,P0.05),胃窦MMCⅢ期样收缩活动明显减弱(2d,P0.01;4d,P0.05),PVN内c-Fos表达显著增加(2h,P0.05)。 7.TT细胞MTL的表达、分泌和调控研究显示,TT细胞内有大量MTL免疫阳性物及其前体mRNA的表达,且MTL与CT共表达于同一细胞;TT细胞可分泌MTL且生长素(GH)和促甲状腺激素(TSH)可显著促进TT细胞MTL的分泌(P0.05);MTL可显著促进TT细胞的增殖(P0.05),干扰MTL基因表达可显著抑制TT细胞的增殖、侵袭和转移(P0.05)。 结论: 1.甲状腺和TT细胞有MTL及其前体mRNA表达,且MTL与CT共表达于C细胞。 2.人甲状腺和人小肠MTL前体mRNA基因序列相同。 3.MTL及其前体mRNA在甲状腺髓样癌呈高表达,而在甲状腺乳头状癌和滤泡癌呈低表达。 4.MTL参与下丘脑PVN-垂体-甲状腺胃运动的调控,甲状腺可反馈影响下丘脑、垂体MTL的表达。 5.GH和TSH可显著促进TT细胞MTL的分泌;MTL可显著增强TT细胞增殖、侵袭和转移能力。


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