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HSV-1,HSV-2,EBV和HCMV的基因诊断研究

许开利  
【摘要】: 目的 采用一种试验方法,经PCR结合酶切同时利用内参照一次区分四种疱疹病毒感染。 方法 利用DNAstar软件包分别从HCMV,HSV-1,HSV-2和EBV的DNA聚合酶高保守基因区中设计一对共享序列引物,根据四种基因产物序列选择Sma I和BamH I作为限制性内切酶,对PCR产物进行酶切,同时在相同条件下,利用β_2-MG作为内参照,进行反应体系的内部质控,从而验证扩增是否成功。做到在一个方法中,经一次PCR扩增并结合酶切即可区分四种病毒的感染。结果与细胞培养比较从而对该试验方法作出评估。 结果 β_2-MG及共享序列引物均出现扩增条带为阳性,阳性者经Southern杂交证实特异性,再结合限制性酶切,电泳后四种病毒扩增的产物分别是HCMV 594bp,HSV-1与HSV-2均为522bp,EBV 528bp.HSV-1被SmaI酶切形成478和44 bp两个片段,但没有BamH I酶切位点;HSV-2被BamH I酶切后形成224和298bp两个片段,没有SmaI酶切位点;EBV各有一个SmaI和BamH酶切位点,分别切成101与427,246和282bp四个片段;HCMV没有两种酶切位点。用此方法检测临床标本与细胞培养比较后,得出3项重要的综合评估指标,及诊断敏感性、诊断特异性和诊断指数分别为100%,92.3%和192.3%,均在理想范围内。 结论 方法验证和评估指标证实了该法的可行性,PCR结合酶切利用内参照可作为一种简易,快速,敏感和特异的对四种疱疹病毒科病毒基因鉴别诊断方法,从而为临床提供诊断参考。此法的建立对早期发现孕妇活动性HSV-1或HCMV感染并及时予以特异治疗,防止和减少先天性畸形以及优生优育实验室监测工作有重要意义。


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