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小鼠来源树突状细胞联合细胞因子激活的T细胞抗白血病及肿瘤的实验研究

张盛  
【摘要】: 研究目的:为了更有效的在体外及体内建立抗L615急性白血病和Sp2/0骨髓瘤的抗瘤免疫,观察了单独应用CAT,CAT加CY,DC与CAT联合等不同策略的治疗效果。 研究方法:(1)将小鼠骨髓单个核细胞在1×10~6/ml浓度下,以10ng/ml GM-CSF和10ng/ml IL-4条件下诱导7-8天,再以全瘤细胞溶解物或1μg/ml LPS促使成熟,收集悬浮和轻微贴壁的细胞即为DC。将收集的DC进行形态及表型鉴定,并用MTT法检测其刺激异基因处女型T细胞增殖能力和抗原递呈能力。(2)将小鼠脾脏溶红细胞后时单个核细胞调为5-7×10~6/ml,加小鼠IFS-γ1000U/ml(100ng/ml),24小时后补加IL-1β5ng/ml,抗CD3,单抗为1μg/ml。再培养24小时后将其体积扩为3-4倍并加重组人IL-2,终浓度为50U/ml,收集培养第5-8天的激活细胞,即为CAT。以Thy1.2检测其表型,部分细胞持续培养至28天并绘制增殖曲线。(3)以MTT法,LDH法及~(51)Cr释放法检测CAT对不同靶细胞的杀伤能力。(4)建立L615及Sp2/0荷瘤模型,分别以CAT或联合CY治疗。(5)CAT与瘤细胞混合后注入动物体内观察发病情况,即Winn实验。(6)将全瘤细胞溶解物冲击的DC与CAT混个培养七天,即为DC-CAT。检测DC-CAT的体外杀伤和Winn实验。(7)将全瘤细胞溶解物冲击的DC予小鼠以2×10~5/只注入,七天后取脾细胞诱导CAT,即为SET细胞(specific effector T cells)。检测SET细胞的体外杀伤和体内治疗作用,并做Winn实验。 结果:(1)可以从小鼠骨髓诱导出典型的DC,其胞体较大,突起较多,高表达CD11c,CD40,CD80,CD86,I-A等。并具有强大的刺激异基因处女型T细胞增殖的能力,有较高的抗原递呈能力。(2)从小鼠肿细胞可以扩增出大量的CAT,其表型为Thy1.2阳性。形态学观察发现第5-8天的CAT形状呈较大的长条形,细胞透亮。增殖曲线可见此时的CAT增殖能力最旺盛。(3)~(51)Cr释放法检测发现CAT对Yac-1,SP2/0及L615等多种靶细胞无明显的4小时杀伤作用,且无MHC限制性并与诱导CAT的时间无关。(4)以CAT做winn实验及对荷瘤小鼠治疗实验均无效。但联合CY可治愈83.3%的L615白血病小鼠,对治愈小鼠给予小量L615细胞再攻击均死亡。细胞治疗的数量,所用CAT诱导的时间,CY化疗的时机以及初始给以L615细胞使 DC联合CAT抗白血病和肿瘤的实验研究 之发病的细胞数量均与治疗效果有关。(5)DCCAT在体外可呈现特异性的杀伤作用, 远高于*AT。与L6 15全瘤细胞溶角剥吻冲击过的DC共培养七无的*A工体外对[615 的杀伤效果,可山*AT的h提高到ZWi人右。——实验证实可延长of 5白血M小 鼠的上存时间(山11 s右延K到ZO a右)。(6)DC免疫厂的*A丁仍一勺-’二Z 性斗小时杀伤作用。但wnn实验证实可延长u15白 丙小鼠的飞存期,‘j C\川;丁了 时小剂量CAT即可有效,但单独治疗白血病仍然无效。对SP2/0骨髓j&模型,、。till。 实 实可避免小鼠肿瘤的形成。当其单独治疗蚊洲荷瘤小鼠阶,。丁延绸J叫N川刊J 时向,减慢肿瘤进展。 结论日()刁鼠月细…的*AT与*Y眺具有强*的抗卜6卜V丁厂1~卜 丁.二、严*厂j 能,但不能建立有效的特异,件保护免疫。其抗白血病功能与*叮诱牙W时D”小几卜八小 鼠发病时的u15细胞数量,*Y的应用时机及*A工治疗的细胞数萤有人。二;仇卜;乙 冲击的DC与*AT共培养可以提高*AT的体夕+杀伤能力,_实验h正实。。l辽u”川八 病小鼠的生存期。(3)DC免疫后的小鼠脾细胞诱导而来的 CAT,虽然缺乏 4小川卜f 伤能力,但——实验可延长u15白血病小鼠的生存期。与*Y联合较低”川hJ勺 效c对 SP2/0骨髓]留模型体内治疗oAf效。(4)本研究为 CAI”止 DC b)丫t <”Af;-;。。 *1虹病及实体肿瘤提供重要的实验依扼。


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