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白血病细胞系来源的树突状细胞的诱导、鉴定及冻存方法的研究

王宝中  
【摘要】:目的 诱导K562细胞系向树突状细胞转化,寻找一种快速、简便、高效的获取DC方法。 方法 1.分组 取对数生长期的K562细胞,以5×10~5/ml的浓度接种至24孔板中,并于实验组中分别加入①A23187使终浓度为250ng/ml ②A23187 180ng/ml和rhGM-CSF500U/ml ③rhGM-CSF1000U/ml、rhIL-4500U/ml及rhTNF-α 200U/ml,37℃饱和湿度,5%CO2培养箱中培养7天左右,隔天半量换液并给实验孔补加半量诱导因子。2.形态学观察 通过倒置显微镜观察诱导细胞形态学的动态变化并摄像。3.DC表型鉴定 运用流式细胞术检测诱导K562-DC表面分子CD1a、HLA-DR、CD54、CD83、CD80及CD86表达率,以了解诱导前后及不同方法诱导K562表面分子的差异。4.功能检测MTT法检测DC对异基因淋巴细胞的刺激增殖能力及其致敏T细胞对靶细胞的杀伤作用。 结果 上述三种因子组合均能诱导K562细胞系向成熟DC转化,且含A23187的两组72小时获得DC样细胞的数量明显多于不含A23187的CK组(P<0.05),诱导率分别为(68.96±11.38)%、(76.78±11.12)%、(22.05±3.98)%,且均高表达CD1a、CD80、HLA—DR、CD83、及CD86。另外,三组所获DC在对异基因淋巴细胞的刺激增殖能力及其致敏T细胞对靶细胞的杀伤作用无明显差异(P均>0.05)。 结论 A23187可快速(72小时以内)诱导K562细胞系向成熟DC转化,且与联合细胞因子GM-CSF、IL-4及TNF-α诱导所获树突状细胞在形态、表型及功能方面基本相同。


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