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INOSINE对脑缺血再灌流后神经细胞凋亡及细胞色素C和卡配因表达的影响

张红  
【摘要】:目的:研究肌苷(Inosine)对大鼠局灶性脑缺血再灌流后神经细胞凋亡、细胞色素C(CytC)、卡配因(Calpain)基因表达的影响,从细胞凋亡基因调控角度探讨Inosine的神经保护作用机制。方法:应用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌流模型,腹腔注射Inosine注射液(100mg/kg),应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别观察大鼠脑缺血90min再灌流2h、6h、12h、1d、2d、3d、7d和14d等不同时间点神经细胞凋亡、CytC mRNA和Calpain mRNA表达的变化。结果:(1)细胞凋亡:脑缺血再灌流后2h皮层区与纹状体区即出现凋亡细胞,再灌流6h时明显增加,皮层区1d达高峰,纹状体区2d达高峰,之后逐渐减少,至14d接近于假手术组水平。经Inosine治疗后,皮层和纹状体区凋亡神经细胞减少,其中再灌流12h、1d、2d、3d、7d较对照组有显著差异。(2)CytC:脑缺血再灌流后皮层区与纹状体区CytC mRNA的表达于2h逐渐出现,皮层区12h达高峰,纹状体区1d达高峰,以后逐渐下降,7d、14d明显减少,但仍明显高于假手术组。Inosine治疗组再灌流12h及以后时间点,CytC mRNA在皮层区和纹状体区的表达较对照组有显著降低。(3)Calpain:脑缺血再灌流后皮层区和纹状体区Calpain mRNA的表达于2h逐渐出现,6h时明显增加,皮层区12h达高峰,以后逐渐下降;纹状体区1d达高峰,3d后逐渐降低,7d、14d明显减少,但仍明显高于假手术组。Inosine治疗组再灌流12h及以后时间点,Calpain mRNA在皮层区和纹状体区的表达较对照组有显著降低。结论:脑缺血再灌流后可诱导皮层区和纹状体区神经细胞凋亡,细胞凋亡是一个动态的演变过程。脑缺血再灌流后CytC mRNA表达时相和高峰先于凋亡细胞出现,提示CytC自线粒体释放入胞浆是凋亡发生的关键的一步。脑缺血再灌流后Calpain mRNA表达的时序和区域与CytC一致,均早于细胞凋亡的发生,说明在诱导细胞凋亡中需要Calpain参与。大鼠脑缺血后再灌流前给予腹腔注射Inosine后,CytC mRNA和Calpain mRNA表达降低,神经细胞凋亡减少,提示Inosine具有抑制细胞凋亡和神经保护作用,对缺血性脑血管病的治疗具有潜在的应用价值。


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