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沙蛰毒素的毒理学研究

史冬梅  
【摘要】:目的:筛选有效的提取沙蜇刺胞毒素方法。比较两种方法粗提沙蜇刺胞毒素的溶血活性(方法A粗提沙蜇刺胞毒素、方法B粗提沙蜇刺胞毒素)。将所得沙蜇刺胞毒素进行动物实验,分析毒素的性质,为刺胞皮炎的预防和治疗提供依据。 方法:(1)方法A采取Burnett改良法,方法B采取新鲜沙蜇自溶法。(2)比较方法A和方法B两种粗提沙蜇刺胞毒素的溶血活性。取16名健康人的抗凝血制成0.5%红细胞悬液。将每例新鲜红细胞悬液均分为16份,每份均为1ml。将两种方法粗提沙蜇刺胞毒素用10mM PBS(PH7.4)分别配制成不同浓度的6个实验组、阴性对照组(10mMPBS,PH7.4)、阳性对照组(10mMPBS 1.0ml和0.5%SDS2μl),各组均取1ml,并加入1ml 0.5%红细胞悬液,4℃孵育过夜,分光光度计测蛋白浓度,计算粗提沙蜇刺胞毒素的50%溶血率。比较两种方法粗提沙蜇刺胞毒素的溶血活性。(2)将100只小鼠按照随机的方法5组,各组小鼠均经尾部静脉注射浓度分别为2.700mg/kg、2.16 0mg/kg、1.728 mg/kg、1.3842 mg/kg、1.106 mg/kg粗提沙蜇刺胞毒素0.5ml,观察记录小鼠注射粗提沙蜇刺胞毒素后各系统器官的反应以及24小时小鼠的死亡数,并将死亡小鼠快速尸解,取脑、肺、肝脏组织切片,观察组织变化。 结果:(1)两种方法粗提沙蜇刺胞毒素均可致人类新鲜红细胞溶血。两种方法粗提沙蜇刺胞毒素的溶血活性没有区别。方法A粗提沙蜇刺胞毒素的半数溶血量为151.89μg/ml,95%可信区间为135.18-171.65μg/ml。(2)粗提沙蜇刺胞毒素可以致小鼠死亡,小鼠的半数致死量为1.60mg/kg,95%可信区间为1.42762-1.78185mg/kg。各器官系统的观察结果发现小鼠出现静伏少动、竖毛、蜷缩、后肢伸展、 中文摘要 松弛、走路蹄珊、感觉稍迟钝、心率减慢、腹式呼吸等症状,巧min左右部分受试 小鼠开始出现抽搐死亡,大部分小鼠的死亡时间在给药后8h之前,8h后受试存活 小鼠的异常症状陆续开始恢复。组织切片结果发现脑、肝脏、心脏组织有明显的改 变。脑组织轻度水肿、脑膜小血管扩张、充血、脑膜淋巴细胞浸润。肝脏组织学观 察肝血窦扩张、淤血,肝细胞间见中性粒细胞浸润,淋巴细胞浸润。肺组织观察结 果发现,肺泡壁毛细血管、小静脉扩张充血、肺泡腔内淋巴细胞、浆细胞浸润,肺 泡腔间隔增宽,大量炎性细胞浸润。 结论:粗提沙蚕刺胞毒素可以致人类红细胞溶血,两种方法粗提沙蛮刺胞毒素 溶血活性没有显著性差异。粗提沙哲刺胞毒素和其他的剧毒动物毒素一样有溶血活 性,对小鼠具有致死性。我们对于引起刺胞皮炎的沙蚕刺胞毒素的理化性质的研 究,将对于刺胞皮炎的治疗和预防开辟一条重要的途径。


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