收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

微型寡核苷酸芯片检测脑脊液病原菌的初步研究

毕春霞  
【摘要】:目的 初步研究和建立微型寡核苷酸芯片快速检测脑脊液标本中常见病原菌的方法,为最终完善并建立脑脊液病原微生物感染寡核苷酸检测芯片的技术路线和实验方案进行初步探索。 方法① 通过对脑脊液标本中常见病原菌16S rRNA基因保守区的序列分析,设计通用引物(Universal primer, UP),对不同细菌的DNA进行UP-PCR扩增,确定标本是否有细菌感染。②用Primer Premier软件分别设计所有细菌的通用探针、革兰阳性和阴性菌通用探针、肠杆菌科的属探针、嗜血杆菌属探针、脑膜炎奈瑟菌、金黄色葡萄球菌探针、凝固酶阴性葡萄球菌探针、肺炎链球菌探针,及产单核李斯特菌探针,将探针加尾后固定于尼龙膜上,制成简易寡核苷酸芯片。③提取各病原体DNA后UP-PCR扩增,扩增过程中用Bio-16-dUTP进行标记;将上述扩增产物变性后分别与点有各种探针的尼龙膜反向杂交,然后用碱磷酶标记链霉亲合素进行显色。④对检测体系的敏感性和特异性进行了测试;⑤利用该寡核苷酸芯片检测方法对32例经临床实验室常规培养鉴定方法确定为细菌感染的CSF标本进行鉴定。 结果 ①所有实验菌株经UP-PCR扩增均获得372bp左右的产物,与设计相符。②该方法最低可检测出10CFU/mL的大肠埃希菌;③每种探针只与通用探针及其相应的细菌DNA杂交,而不与其他细菌探针及阴性对照探针杂交,表明所有探针均具有较高的特异性;④该方法和常规培养鉴定方法对32例临床CSF标本的检测结果完全一致。 结论 本研究初步建立的CSF病原菌寡核苷酸芯片检测芯片能够准确、敏感、快速、高效地检测脑脊液标本中病原菌的感染;本研究结果为进一步完善和建立脑脊液病原微生物感染寡核苷酸检测芯片打下了基础,并值得临床推广应用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 余嘉丽;脑脊液C-反应蛋白的快速测定法[J];临床检验杂志;1986年01期
2 史兰爱;凌淼;;脑脊液测定的临床意义[J];工企医刊;1999年03期
3 韩萍;卢知吾;;脑膜炎脑脊液的白细胞聚集现象[J];传染病信息;1997年03期
4 王笑中;中枢神经系统疾病的脑脊液乳酸观测[J];国际流行病学传染病学杂志;1983年04期
5 孙志华,温洁,郭俊舫;C-反应蛋白测定临床诊断意义[J];哈尔滨医科大学学报;1986年04期
6 李平;;老年呼吸系统细菌感染的抗菌治疗[J];中国初级卫生保健;1987年11期
7 RJ WYKE;孙国武;;肝脏病时细菌感染的一些问题[J];国际消化病杂志;1988年02期
8 Piccolomini R ,李俊峰;环丙沙星和阿洛西林联用(1:10)对非中性粒细胞减少血液病人革兰氏阴性菌感染的临床效果及其体外活性[J];国外医药.抗生素分册;1993年04期
9 邱卡仪,林燕青,林仁菊;肺结核病人肺部合并其它细菌感染的调查分析[J];福建医药杂志;1998年01期
10 赵雪芬,张彩萍;氧氟沙星治疗细菌感染性疾病240例[J];河北医药;1999年02期
11 杨俊芳,刘贵健,张永宏,赵淑芳;细菌感染CRP、NAP、WBC、DC四项实验指标的比较观察[J];临床和实验医学杂志;2002年01期
12 汪明明;孙玉秋;崔速南;张景遥;张娟;;血清降钙素原水平与细菌感染的相关性分析[J];传染病信息;2002年03期
13 曹伟,代洪,童明华,刘礼;慢性前列腺炎细菌感染及耐药性监测[J];中华医院感染学杂志;2003年08期
14 田社民,李允,魏莹,闫玉玲;郑州市第一人民医院严重烧伤患者感染细菌调查[J];中国误诊学杂志;2004年09期
15 尚小领,张玉妥,张艳芳;不同年龄组化脓性中耳炎病原学研究[J];临床耳鼻咽喉科杂志;2005年07期
16 翟洪玉,孙路路,陆非平;左氧氟沙星治疗COPD合并肺部感染的疗效观察[J];中国现代医药杂志;2005年05期
17 焦晓阳,吴映娥,彭学宏,林静华,蔡应木;抗生素诱导内毒素释放对感染患者T淋巴细胞免疫功能的影响[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2005年07期
18 孙燕萍;对医院内镜清洗和消毒灭菌效果检测的报告[J];现代预防医学;2005年11期
19 杨俊红;孔艳荣;;PCT的诱导机制及临床应用价值综述[J];中国社区医师(综合版);2005年17期
20 申云;;小心抗生素[J];家庭教育(婴幼儿家长);2005年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨祖钦;尚世强;吴亦栋;;脑脊液细菌16SrRNA荧光定量快速诊断儿童化脓性脑膜炎[A];2005年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术会议论文汇编[C];2005年
2 胡兴越;夏萍;邵宇权;;脑脊液细胞学诊断软脑膜转移肿瘤[A];中华医学会第12次全国内科学术会议论文汇编[C];2009年
3 张伟令;张谊;黄东生;王一卓;洪亮;朱霞;张品伟;李苹;周燕;;脑脊液NSE与儿童视网膜母细胞瘤病理的相关性研究[A];第八届全国儿童肿瘤学术会议论文汇编[C];2009年
4 黄建军;陆燕芬;;84例小儿化脓性脑膜炎治疗后脑脊液葡萄糖含量分析[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
5 陈志成;陈庆炘;;脑结核瘤脑脊液分析[A];中国防痨杂志2003第25卷增刊——2003年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2003年
6 张齐龙;宗佩兰;雷建平;杨水秀;叶琳;郭晓莹;;腰池持续引流脑脊液治疗结核性脑膜炎临床价值研究[A];中华医学会结核病学分会2004年学术会议论文汇编[C];2004年
7 王婧;阴赪宏;冯曼玲;纪爱萍;栗绍刚;吴赵永;郑晓燕;齐海宇;李小丽;汤雯;林瑾;;69例广州管圆线虫病患者脑脊液特点及临床意义[A];第四届全国灾害医学学术会议暨第二届“华森杯”灾害医学优秀学术论文评审会学术论文集[C];2007年
8 杨澎湃;袁琼嘉;;递增负荷运动后大鼠脑脊液和大脑皮质单胺类神经递质的动态变化[A];第八届全国体育科学大会论文摘要汇编(二)[C];2007年
9 谈鹰;王庄;王亚仙;;结核性脑膜炎患者脑脊液中腺苷脱氨酶的诊断意义及动态变化观察[A];浙江省医学会呼吸系病分会成立三十周年庆典活动暨2008年呼吸病学学术年会论文汇编[C];2008年
10 胡兴越;夏萍;邵宇权;;脑脊液细胞学诊断软脑膜转移肿瘤[A];2008年浙江省内科学学术会议论文汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李宇;普外科胆道手术细菌感染及细菌对抗菌药物敏感性的调查与研究[D];吉林大学;2005年
2 李康安;VEGF反义核酸调控脑脊液源性转移的磁共振监测[D];复旦大学;2006年
3 于雪凡;脑脊液14-3-3蛋白的定量检测及脑组织内的表达对sCJD诊断价值的研究[D];吉林大学;2006年
4 姜曙;脑池造影计算机断层动态扫描对脑脊液动力学异常相关疾病诊断价值的临床研究[D];四川大学;2007年
5 张中原;颅脑损伤后血清、脑脊液IL1β,IL6的变化及临床意义[D];天津医科大学;2012年
6 孔屏;帕金森病人脑脊液神经毒性及单胺氧化酶-B抑制剂和多巴胺激动剂的保护作用的研究[D];天津医科大学;2006年
7 高金立;脑脊液和血清s100β蛋白检测及s100β基因表达对克-雅氏病诊断价值的研究[D];吉林大学;2005年
8 张恒;脑积水动物蛛网膜绒毛内皮细胞形态与功能改变的实验研究[D];四川大学;2005年
9 金涛;格林—巴利综合征脑脊液蛋白质组学的研究[D];吉林大学;2007年
10 边红;脑脊液生物标志物在病理确诊的额颞叶变性和阿尔茨海默病中的研究[D];山东大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王慧;中枢神经系统感染患儿脑脊液胰岛素样生长因子-Ⅱ和胰岛素样生长因子结合蛋白-3水平变化研究[D];吉林大学;2005年
2 孟兆华;免疫细胞化学的方法在结脑早期诊断中的价值的研究[D];河北医科大学;2006年
3 魏友平;1.5T MRI正常成人脑组织弥散加权成像ADC值的定量测量研究[D];苏州大学;2006年
4 刘国平;脑脊液对神经干细胞增殖分化影响的实验研究[D];中南大学;2007年
5 徐国荣;结核性脑膜炎患者脑脊液白细胞介素23的水平测定及意义探讨[D];南昌大学;2009年
6 毕春霞;微型寡核苷酸芯片检测脑脊液病原菌的初步研究[D];青岛大学;2005年
7 梁燕;脑膜炎患者脑脊液中肿瘤坏死因子、乳酸脱氢酶及其同工酶的检测及临床意义[D];青岛大学;2006年
8 唐玫;难治性癫痫患者血清和脑脊液中MCP-1表达的研究[D];广西医科大学;2009年
9 罗自勉;经脑室内应用尿激酶治疗脑室出血的机制研究[D];中南大学;2009年
10 陈学彬;人脑胶质瘤AHSG的相关性研究[D];苏州大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 衣晓峰 靳万庆 本报记者  魏然;儿童中枢神经系统感染临床研究新进展[N];中国中医药报;2007年
2 魏鑫;腰穿是抽脑(骨)髓吗?[N];保健时报;2006年
3 衣晓峰 魏然;儿童中枢神经系统感染研究获新进展[N];中国医药报;2007年
4 李明珠;流脑的临床诊断[N];农村医药报(汉);2006年
5 朱立明;我国危重呼吸衰竭救治研究取得进展[N];中国医药报;2007年
6 仇倩;发生颅骨骨折勿盲目处理[N];医药养生保健报;2006年
7 中南大学湘雅医院急诊科教授 罗学宏;C群流脑首现 防治应对有法[N];湖南科技报;2007年
8 陈琳 黄红云 江昭;外伤后脑积水 分流没商量[N];健康报;2006年
9 衣晓峰 魏然;IGF-1修复中枢神经损伤[N];健康报;2007年
10 朱立明;危重呼吸衰竭救治有了新方法[N];家庭医生报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978