糖皮质激素对巨噬细胞快速非基因组作用的研究

【摘要】：糖皮质激素(glucocorticoid,GC)的基因组作用机制虽然已得到公认,但是越来越多的证据表明,GC还存在着不同于经典基因组作用的非基因组作用。关于GC非基因组作用和机制的研究报道已有很多,但是大部分局限于神经和内分泌系统的调节作用。然而临床上GC最常应用于抗炎和抑制免疫治疗。迄今为止,关于GC的抗炎和抗免疫方面作用尚未见相关报道。巨噬细胞是体内参与炎症反应和免疫的重要细胞。本实验选择小鼠腹腔巨噬细胞,观察短时间(30min)内GC对巨噬细胞吞噬功能和产生超氧阴离子的影响,旨在探讨GC对巨噬细胞的非基因组作用的可能机制。 本实验分离并纯化经巯基乙醇酸钠诱导的小鼠腹腔巨噬细胞,应用中性红(Neutral red,NR)吞噬分析法检测巨噬细胞的吞噬功能;细胞色素C(cytochrome C,Cyto C)还原法检测经PMA刺激后的巨噬细胞超氧阴离子的生成量。结果如下: (1) 10~(-4)mol/L和10~(-5)mol/L皮质酮(corticosterone,CORT)、甲基强的松龙(methylprednisolone,METH)和氢化考的松(hydrocortisone,HYDR)在30min内均能抑制巨噬细胞吞噬功能;任何浓度地塞米松(Dexamethone,DEXA)和10~(-6)mol/L CORT、METH、HYDY在30min内不能能抑制巨噬细胞吞噬功能。 (2)10~(-4)mol/L～10~(-10)mol/LCORT、METH、HYDR和DEXA在30min内均能抑制巨噬细胞产生超氧阴离子,且随着浓度的升高,其抑制作用增强。 (3)RU486(mifepristone)是GC经典受体(GCR)拮抗剂,可以与胞浆内的GC受体结合而阻断GC的基因组作用。GC基因组作用是通过最终效应蛋白发挥作用的,蛋白质合成抑制剂放线菌酮(actidion,ACTI)阻断GC的基因组作用。小牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)是一种大分子物质,而实验证明BSA在30min内很少进入胞浆内,因此BSA偶联的皮质酮(BSA-CORT)在30min内不可能与胞浆受体结合而发挥基因组作用。在反应体系内分别加入RU486和ACTI,发现GC依旧能发挥上述快速抑制作用;BSA-CORT亦能在短时间(30min)内发挥上述快速抑制作用。