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扇贝裙边糖胺聚糖对泡沫细胞抑制作用的研究

孙福生  
【摘要】:目的:研究扇贝裙边提取物—糖胺聚糖(SS-GAG)对泡沫细胞的抑制作用,探讨SS-GAG的抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。 方法:1.采用体外培养的U937细胞和氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)建立单核细胞源性泡沫细胞模型,通过酶法检测细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量及胆固醇酯与总阻固醇的比值(CE/TC),研究SS-GAG对单核细胞源性泡沫细胞形成的影响。 2.利用体外培养的U937泡沫细胞,应用黄嘌呤氧化酶法、谷胱甘肽还原酶法观察SS-GAG对单核细胞源性泡沫细胞形成过程中抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的影响。 3.采用体外培养的U937单核细胞源性泡沫细胞模型,应用硝酸还原酶法观察SS-GAG对泡沫细胞形成过程中细胞分泌一氧化氮(NO)含量的影响。 4.应用酶联免疫吸附实验(ELISA)法,观察SS-GAG对U937单核细胞源性泡沫细胞形成过程中细胞的血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。 5.利用体外培养的U937单核细胞源性泡沫细胞模型,用酶联免疫吸附实验(ELISA)法,观察SS-GAG对泡沫细胞形成过程中细胞表达的肿瘤坏死因子(TNFα)、白介素6(I1-6)和白介素6(I1-8)的影响。 6.应用Fluo-3/AM荧光探针和流式细胞仪(FCM)观察SS-GAG对体外培养的U937单核细胞源性泡沫细胞形成过程中对细胞内钙离子水平的影响。 7.利用体外培养的猪血管平滑肌细胞(SMC)和OX-LDL建立平滑肌源性泡沫细胞模型,通过酶法检测细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量及胆固醇酯与总胆固醇的比值(CE/TC),研究SS-GAG对平滑肌细胞源性泡沫细胞形成的影响。 8.采用体外培养的猪血管平滑肌细胞源性泡沫细胞模型,应用黄嘌呤氧化酶法、谷胱甘肽还原酶法观察SS-GAG对平滑肌源性泡沫细胞形成过程中抗氧化酶SOD、GSH-PX活性的影响. 9.利用体外培养的猪血管平滑肌源性泡沫细胞模型,应用硝酸还原酶法观察SS-GAG对泡沫细胞形成过程中细胞分泌的NO含量的影响。 结果:1.成功地建立了猪血管平滑肌源性泡沫细胞模型;在培养的平滑肌源性


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