RAPD技术对结核分枝杆菌菌株鉴别及其耐药相关性研究

【摘要】：目的:结核病的防治研究是目前我国疾病控制的重要课题。因此,快速、准确地鉴别结核分枝杆菌临床分离株以及对其耐药谱的确定,对该病的流行控制、治疗监控及药物选择有重要的意义。随机扩增多态性DNA(RAPD)分析法是建立在PCR基础上的一种检测基因组多态性的基因分型技术,目前已得到广泛应用。本实验采用RAPD分型技术,对青岛地区结核分枝杆菌临床分离株进行菌株鉴定及其耐药相关性分析,探讨青岛地区结核分枝杆菌的传播动态,监测耐药菌株的发展,有助于指导临床治疗和预防。 方法:收取青岛胸科医院自2003年3月至2004年12月间收治确诊为肺结核的患者60例,H_(37)Rv标准菌株购于中国药品生物制品检定所。患者男性42例,女性18例,年龄35-76岁,中位年龄56岁。年龄20岁的4例(6.7%),20～29岁的18例(30.0%),30～39岁的13例(21.7%),40～49岁的13例(21.7%),50～60岁的6例(10.0%),〉60岁的6例(10.0%)。初治24例,复治36例。采集患者痰液标本,经过结核杆菌的分离培养,根据“结核病细菌诊断学检验规程”做菌型鉴定,以改良罗氏培养基绝对浓度法做药物敏感性试验;经结核分枝杆菌基因组DNA的提取,用一条引物,应用聚合酶链反应(PCR)进行随机扩增多态性分析,扩增产物用琼脂糖凝胶电泳。统计方法采用随机抽样和双盲法平行分析样本,计算机归类、排序统计分析资料。 结果:痰标本培养结果均为阳性,并经抗酸染色镜检确定为结核分枝杆菌,通