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核因子Kappa-B在人白内障晶状体前囊膜上皮细胞的表达

杨茜  
【摘要】:目的:研究核因子kappa-B在正常人晶状体、年龄相关性白内障、外伤性白内障以及先天性白内障的晶状体前囊膜上皮细胞中表达的差异,探讨NF-KB在白内障发病机制中的作用和地位。 方法:显微镜下搜集年龄相关性白内障、外伤性白内障、先天性白内障以及正常尸眼供体的晶状体前囊膜组织。-180℃液氮中保存。提取人眼晶状体前囊膜组织总RNA,并以Oligo(DT)引物逆转录合成cDNA;根据Gene Bank中的人NF-KBp65亚基mRNA序列(GeneBank:L19067),设计扩增核因子kappa-Bp65亚基的PCR引物,以及设计看家基因β-actin(GeneBank:E00829)内参照引物。通过核因子Kappa B以及内参照β-actin的动力学实验,选择内参照引物进行26个PCR反应循环,目的基因核因子Kappa B引物进行29个循环。经多聚酶链反应PCR后,以2.0%~3.0%的琼脂糖(含5μg/l溴化乙啶)凝胶电泳,在紫外透射/凝胶成像仪上成像,检测目的基因片段NF-KB扩增引物的表达,并用BiocapMw分析软件分析,对目的基因片段相对定量。应用SPSS11.5统计软件包的Independent-Samples T test进行统计学处理。以P0.05作为差别有显著性标准。 结果:经PCR扩增后获得约354bp大小的核因子KB p65的目的片段。与正常对照组的均数0.8337比较,年龄相关性白内障患者晶状体上皮细胞中NF-KB的相对表达量均数为0.9998,后者NF-KB表达量增加,差异具有非常显著意义(T=4.016;P0.05);与正常人比较,外伤性白内障患者晶状体上皮细胞中NF-KB的表达量也升高,为0.9074,差异同样具有非常显著的意义(T=2.447;P0.05)。与足月正常胚胎组(均数为0.8341)相对照,先天性白内障患者晶状体上皮细胞中NF-KB的表达量升高,均数为0.9313,差异同样具有显著性(T=4.27,P0.05)。 结论:核因子KB是维持正常晶状体上皮细胞代谢所需的一种转录因子,在年龄相关性白内障、外伤性白内障和先天性白内障中,升高的NF-KB可能导致了晶状体上皮细胞的某些基因表达异常。白内障的病因很多,但NF-KB可能是白内障发生与发展过程中的中心环节。


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