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兔骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及生物学特性研究

董玉泉  
【摘要】:目的 建立兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养、扩增和鉴定的方法,对其生物学特性进行观察,为其用于组织工程提供实验基础。 方法 穿刺抽取兔髂骨骨髓,用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合,分离兔骨髓间充质干细胞,进行体外培养扩增,绘制其生长曲线,计算倍增时间,测定细胞贴壁率和细胞活力,用倒置显微镜、透射电镜观察细胞的生物学性状。通过免疫荧光组织化学鉴定细胞,了解其部分表型特点。 结果 分离培养的细胞贴壁生长,呈梭形,细胞增殖能力强,原代细胞呈集落生长,12-15天达到融合,传代后增殖速度加快,平均倍增时间为34h,随传达次数的增加细胞的增殖能力有所下降,1、3、5代细胞接种12h后贴壁率在90%以上,第1—5代活细胞比例在95%以上,第6、7代培养细胞活力下降,透射电镜显示细胞分裂增殖能力旺盛。骨髓MSCs均一表CD_(44),而不表达CD_(34)。 结论 密度梯度离心与贴壁培养相结合,可有效分离和扩增骨髓MSCs;分离培养的骨髓MSCs生长稳定,增殖力强,可选用前5代传代细胞作为软骨组织工程的种子细胞;细胞表面标志CD34阴性、CD44阳性可作为鉴定骨髓间充质干细胞(MSCs)的一种方法。


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