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和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠MMP-9、TIMP-1基因表达的影响

刘海军  
【摘要】:目的 研究单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)后大鼠肾脏组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因的表达变化,从而探讨肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis)的发生机制及和络泄浊方对肾间质纤维化的保护作用。 方法 采用左侧输尿管结扎致肾间质纤维化的大鼠模型,将48只Waster大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(UUO)、和络泄浊方治疗组(UUO+REL),每组16只。在术后第一天开始和络泄浊方治疗组给予中药15ml/kg/d,分早晚两次灌胃,假手术组和模型组每天给予等量生理盐水灌胃。在术后3d、10d、20d、30d每组各取4只处死,处死前一天留取24小时尿液,记录总尿量,用于测定各组大鼠24小时尿蛋白定量,腹主动脉取血测定血清肌酐、尿素氮水平,左肾组织行HE染色,动态观察肾脏病理学变化,评定各组大鼠肾小管间质损害程度,免疫组化方法测定肾间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾脏MMP-9、TIMP-1mRNA的变化。并分析TIMP-1mRNA与肾小管间质损伤指数、α-SMA、Ⅳ型胶原的相关性。 结果 各组大鼠24小时尿蛋白定量无统计学差异(P0.05)。各组大鼠血肌酐、尿素氮在第3天时无统计学差异(P0.05)。UUO组血清肌酐、尿素氮在10天后高于Sham组(P0.01),20天达到高峰,继之出现下降。中药灌胃组10天后各时间点明显低于UUO组(P0.01)。UUO组的肾小管间质损伤指数及α-SMA、Ⅳ型胶原、TIMP-1mRNA的表达明显高于Sham组(P0.01),中药灌胃组的肾小管间质损伤指数及α-SMA、Ⅳ型胶原、TIMP-1mRNA表达均明显低于UUO组(P0.01)。MMP-9在UUO术后明显升高,第10天时达到高峰,继之出现下降。中药灌胃组在第10天后下降幅度较小,在20天、30天时间点高于UUO组(P0.01)。TIMP-1mRNA表达的相对量与肾小管间质损伤指数和α-SMA、Ⅳ型胶原的表达呈显著正相关(r值分别为0.92、0.94、0.95,P值均小于0.001)。


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