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共同性外斜视ARIX基因多态性及内直肌细胞外间质分子含量变化研究

刘桂香  
【摘要】:目的:研究共同性外斜视病人ARⅨ基因的多态性以及内直肌细胞外间质分子含量的变化,从中枢及外周水平探讨共同性外斜视是否存在基因水平和眼外肌病理组织学改变以及这些改变对共同性外斜视发生、发展的影响。 材料和方法: 1.ARⅨ基因多态性观察:选择共同性外斜视病人22例,其中,先天性者3例、后天性者19例。22例中具有阳性家族史者7例。同时选择无斜视等眼病并排除遗传性疾病的正常人20例作为对照组。抽取外周血,提取DNA作为PCR扩增的模板,利用DNA Star软件设计分别对应于ARⅨ基因外显子1、2的两对PCR引物,PCR扩增目的基因片段,扩增产物进行琼脂糖凝胶分离,切下特异性扩增条带,回收纯化并克隆在pMD18-T载体上,小量提取质粒后由上海博亚公司测序鉴定。测序结果与GenBank中人ARⅨ基因序列进行同源性比较。统计学处理比较共同性外斜视病人与正常人、先天性与后天性共同性外斜视、以及有无家族史病人之间的核苷酸变化。2.内直肌纤维结合素和蛋白聚糖含量测定:选择共同性外斜视病人常规手术切除的内直肌段为外斜视组,共31例。再将其分成间歇性外斜视和恒定性外斜视2个亚组,分别为17例和14例。正常组选21例正常人相应的内直肌段作为对照。所有内直肌段进行称重、粉碎、研磨、提取上清液,将提取的上清液加入包被人抗纤维结合素或蛋白聚糖单克隆抗体的ELISA板上,室温孵育,再加酶标记的抗纤维结合素或蛋白聚糖单克隆抗体并室温孵育,最后加四甲基联苯胺着色,用Bio-Rad酶标仪450nm测吸光度,先换算出内直肌段的纤维结合素和蛋白聚糖总量,然后通过肌肉段的重量计算出每单位重量(g)内直肌所含的纤维结合素和蛋白聚糖量。统计分析纤维结合素和蛋白聚糖含量在外斜视组与正常组、间歇性外斜视和恒定性外斜视两亚组间、


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