收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

杨梅黄酮对大鼠下丘脑γ-氨基丁酸系统的调制作用及对6-羟基多巴胺损伤大鼠黑质—纹状体系统的保护作用研究

马泽刚  
【摘要】: 在现代社会中,失眠是一种常见的睡眠失调疾病,据统计,约有50%的成年人有过失眠的经历,部分患者发展成为慢性失眠,治疗起来非常困难。目前治疗失眠的药物主要集中在苯二氮卓类γ-氨基丁酸(GABA)受体激动剂以及少量抗抑郁和抗组胺类药物。但是,这些药物都有非常明显的副作用,包括引起头疼、恶心,其残余效应对病人第二天的工作和生活有很大影响,而且会出现停药后反弹的情况。更为严重的是,如果长期服用此类安眠药,将会引起病人对药物的耐受和依赖,从而进入恶性循环。传统的中草药在治疗失眠方面存在着巨大的潜力和优势,但大部分中草药的药理学特性及作用机制都不清楚。近几年来,香港中文大学上皮细胞生物学研究中心从草药中提取出一种有改善睡眠作用的成分,经分离提纯表明,其有效成分是杨梅黄酮。前期实验证实杨梅黄酮能有效地减少实验动物的睡眠潜伏期,增加动物的深度睡眠,而对动物的行为和生物节律没有明显的影响,但其药理学特性及作用机制不清。GABA神经递质系统在睡眠的调节中起到非常重要的作用,目前临床上常用的镇静催眠药物,如Zolpidem等,大都是作用在GABA-A受体起到助眠作用的。实验表明,某些黄酮类化合物也可以作用于GABA-A受体的苯二氮卓(BZ)结合位点从而部分的激活GABA-A受体;也有一些实验报道了某些黄酮类化合物的抗焦虑和抗惊厥样作用。但到目前为止,尚未见杨梅黄酮与GABA-A受体相互作用的报道。本实验应用脑片膜片钳全细胞记录、分子生物学、离子成像等综合技术方法,观察了杨梅黄酮对下丘脑室旁核神经元GABA-A受体介导的抑制性突触后电流(IPSCs)、电压依赖的钙离子通道(VGCC)电流、钾离子通道电流的作用;观察了杨梅黄酮对下丘脑GABA-A受体、组胺受体、Hypocretin受体等基因表达水平的影响;并观察了杨梅黄酮对原代培养的下丘脑神经元细胞内Ca~(2+)浓度的影响。初步探讨了杨梅黄酮对下丘脑室旁核GABA能神经递质系统的调制作用及可能的作用机制。为杨梅黄酮调节睡眠的可能作用机制提供有价值的理论和实验依据。实验结果表明: 1.在记录到的14个细胞当中,杨梅黄酮作用后,下丘脑室旁核神经元GABA-A受体介导的微小抑制性突触后电流(mIPSCs)的半衰减时间显著延长(P<0.01);其中,5个细胞的mIPSCs的频率也有显著增加(K-S检验);3个细胞的mIPSCs的幅度明显降低,1个明显升高(K-S检验)。 2.杨梅黄酮作用后,下丘脑室旁核神经元GABA-A受体介导的自发性抑制性突触后电流(sIPSCs)的半衰减时间显著延长(P<0.01);而细胞的mIPSCs的频率没有明显改变(P>0.05)。 3.苯二氮卓(BZ)结合位点的特异性阻断剂Flumazenil不能抑制杨梅黄酮引起的下丘脑室旁核神经元GABA-A受体介导的mIPSCs半衰减时间的延长,但Ca~(2+)和钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaM-KⅡ)的特异性阻断剂KN-62却能阻断此现象。 4.应用杨梅黄酮后,下丘脑室旁核神经元VGCC电流强度明显增加(P<0.01),电压-电流(Ⅰ-Ⅴ)曲线向超极化方向偏转。进一步的实验表明,应用杨梅黄酮后,高电压激活(HVA)的Ca~(2+)通道电流和低电压激活(LVA)的Ca~(2+)通道电流都有显著增强,结果具有统计学意义(P<0.05)。 5.灌流液中加入杨梅黄酮后,原代培养的下丘脑神经元内Fura-2/AM的荧光强度明显增加,CdCl_2或NiCl_2可以部分的阻断此项作用;应用无Ca~(2+)的灌流液处理细胞时,杨梅黄酮引起的荧光强度增加的现象部分的恢复。 6.下丘脑室旁核神经元有三种放电模式:紧张性放电(tonic fire)、簇状放电(burst fire)和无自发放电(silent neuron)。杨梅黄酮能明显抑制紧张性放电神经元的放电频率(P<0.05);使无自发性放电的神经元的膜电位向超极化方向偏转,结果有显著性差异(P<0.05)。 7.应用杨梅黄酮后,下丘脑室旁核神经元K~+通道电流明显增大(P<0.05);当应用不含有Ca~(2+)的灌流液时,杨梅黄酮引起的此项作用不再出现。 8.腹腔注射杨梅黄酮或GABA-A受体a1亚单位的激动剂Zolpidem 2h后,大鼠下丘脑GABA-A受体a1亚单位的mRNA表达均没有明显变化,处理8h后,a1亚单位的mRNA表达明显下调(P<0.05,杨梅黄酮组;P<0.01,Zolpidem组)。 9.杨梅黄酮或Zolpidem处理大鼠2h后,下丘脑组胺1型受体(H1)和Hypocretin2型受体(Hcrt2)的mRNA表达出现明显下调趋势,但结果没有统计学意义(P>0.05);8h后表达恢复到正常水平。 上述结果表明:杨梅黄酮可以通过增强GABA-A受体介导的抑制性突触后电流从而增强GABA的抑制作用;与Zolpidem不同,杨梅黄酮对GABA-A受体的调节作用机制不是通过作用于GABA-A受体的BZ结合位点实现的。杨梅黄酮可以通过某种作用机制促进VGCC的开放从而引起细胞内Ca~(2+)浓度的增高;而细胞内Ca~(2+)浓度增高介导的CaM-KⅡ的激活又会进一步引起GABA-A受体磷酸化水平的改变,此项作用可能部分的参与到杨梅黄酮对GABA-A受体的调节机制当中。细胞内Ca~(2+)浓度的增高又会激活Ca~(2+)激活的K~+通道,促进K~+的外流而造成细胞膜的超极化,进一步加强了对突触后的抑制作用。在某些实验中,应用杨梅黄酮可以增加mIPSCs的频率,表明其除了在突触后作用于GABA-A受体外,在突触前还可以在某种程度上促进GABA的释放。而分子生物学实验表明,杨梅黄酮还可以调控下丘脑GABA-A受体、H1受体及Hcrt2受体等睡眠相关基因的表达情况。杨梅黄酮对这几种基因表达调控的作用结果与Zolpidem相似。综上所述,杨梅黄酮对下丘脑GABA能神经递质系统的调制作用和Zolpidem不完全相同,其可能通过以Ca~(2+)为核心的调节机制作用于GABA系统,通过加强GABA能神经递质系统的活性起到镇静催眠的作用。本实验对杨梅黄酮调制GABA能神经递质系统作用的研究,为杨梅黄酮参与睡眠调节的作用机制的研究提供了新的理论和实验依据,为把杨梅黄酮开发成一种安全、高效的新型助眠药物提供了新的思路。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 易黎,张苏明,张新江,刘买利;急性脑缺血γ-氨基丁酸的磁共振质子波谱分析与研究[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2002年03期
2 董晓华;张丹参;孟宪勇;;Glu/GABA水平相关性对学习记忆的影响[J];中国老年学杂志;2006年02期
3 付立志;徐进宜;吴晓明;华维一;王其华;;γ-氨基丁酸受体及相关药物研究进展[J];中国医疗前沿;2007年08期
4 乔春楠;刘萍;孙君社;;海藻酸钠法固定化谷氨酸脱羧酶的研究[J];中国生化药物杂志;2008年01期
5 徐静文;刘勇;张德普;赵东波;李景新;;γ-氨基丁酸能系统对肺上皮细胞增殖的影响[J];山东大学学报(医学版);2011年05期
6 许春胜;苏长海;杜绪强;段晓屹;;γ-氨基丁酸治疗共济失调症5例报告[J];滨州医学院学报;1992年02期
7 汪春运;γ-氨基丁酸和精神药理[J];国外医学.精神病学分册;2002年04期
8 林少琴,吴若红;壳聚糖固定谷氨酸脱羧酶的研究[J];药物生物技术;2005年02期
9 韩颖,秦炯,卜定方,杨志仙,常杏芝,杜军保;一氧化氮对热性惊厥大鼠γ-氨基丁酸B受体亚基表达的影响[J];实用儿科临床杂志;2005年09期
10 陈体强,吴锦忠,徐洁;几种中药材中γ-氨基丁酸的测定[J];海峡药学;2005年05期
11 姚扬;杨洋;张涛;杨卓;;γ-氨基丁酸治疗脑缺血的研究进展[J];继续医学教育;2005年12期
12 韩颖;秦炯;卜定方;杨志仙;常杏芝;杜军保;;反复热性惊厥过程中γ-氨基丁酸B受体对一氧化氮/一氧化氮合酶体系的调节作用[J];北京大学学报(医学版);2006年02期
13 戴恩来;欧秀梅;马鸿斌;孙红旭;;通络益智散对拟血管性痴呆大鼠脑组织中Glu和GABA影响的实验研究[J];甘肃中医学院学报;2006年03期
14 王芳;王迪芬;;异丙酚对缺血再灌注损伤的保护作用研究进展[J];滨州医学院学报;2006年06期
15 李燕斐;陈勤;徐业华;汪浩;周逸峰;;吗啡依赖大鼠视皮层GABA及分解代谢酶的变化[J];毒理学杂志;2007年02期
16 李素云;贺性鹏;邓暑芳;万炜;范松青;;甲基叔丁基醚对大鼠小脑γ-氨基丁酸影响[J];中国公共卫生;2007年08期
17 毛小元;蔡际群;;γ-氨基丁酸转运体与癫痫关系的研究进展[J];国际神经病学神经外科学杂志;2009年03期
18 何晓华;刘世育;;γ-氨基丁酸对人末梢血γδT细胞作用的实验研究[J];重庆医学;2010年07期
19 高利民;冯义朝;王恬;王建馗;;肝性脑病发病机制的研究进展[J];国际消化病杂志;2010年02期
20 王子浩;赵景联;郑新红;;固定化大肠杆菌细胞催化L-谷氨酸制备γ-氨基丁酸[J];西北药学杂志;1988年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 丁叶;张召锋;戴小倩;李勇;;杨梅黄酮通过影响线粒体途径改善细胞因子诱导的胰岛β细胞损伤的实验研究[A];北京市营养学会第四届会员代表大会暨膳食与健康研讨会论文集[C];2010年
2 尤新;;γ-氨基丁酸生产应用研发动向[A];2008’中国食物与营养高层论坛论文集[C];2008年
3 赵晓民;夏作理;高允生;刘卫;王德才;朱玉云;张继国;乔现福;;中枢γ-氨基丁酸对清醒活动高血压大鼠血压调控的影响[A];中国微循环学会第五届中国微循环学术大会论文摘要汇编[C];2004年
4 曹德瑞;邹晓庭;李慧;;γ-氨基丁酸对持续高温期生长肥育猪内分泌水平及HSP70基因表达的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
5 朱凤莲;郭学鹏;钱惠茵;;痉挛性脑瘫患儿脑脊液中谷氨酸与γ-氨基丁酸的变化[A];中国康复医学会首届儿童康复学术会议暨中国残疾人康复协会第八届小儿脑瘫学术会议论文汇编[C];2004年
6 张丽丽;容永豪;陈蕾;;大鼠丘脑底核Zolpidem的电生理效应[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年
7 李向平;黄俊;梅乐和;;离子交换法提取γ-氨基丁酸的研究[A];浙江省生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2005年
8 黄怀生;黄亚辉;郑红发;;732阳离子交换树脂分离纯化Gabaron茶中γ-氨基丁酸的研究[A];湖南省茶叶优势区域建设会议暨湖南省茶叶学会2006年学术年会论文集[C];2006年
9 陈体强;吴锦忠;徐洁;;植物产品中γ-氨基丁酸的测定[A];第八届全国中药和天然药物学术研讨会与第五届全国药用植物和植物药学学术研讨会论文集[C];2005年
10 郑红发;黄亚辉;黄怀生;;茶叶中γ-氨基丁酸提取、分离及薄层扫描测定的研究[A];第四届海峡两岸茶业学术研讨会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 马泽刚;杨梅黄酮对大鼠下丘脑γ-氨基丁酸系统的调制作用及对6-羟基多巴胺损伤大鼠黑质—纹状体系统的保护作用研究[D];青岛大学;2007年
2 王华;大鼠前扣带皮层内去抑制的初步探索:痛情绪调控的可能机制[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2006年
3 张荻;多巴胺对大鼠体外培养视皮层神经元γ-氨基丁酸激活电流作用的研究[D];中南大学;2008年
4 何益群;儿童孤独症的高危因素及早期特征、血浆谷氨酸和γ-氨基丁酸浓度、Reelin基因多态性的研究[D];中南大学;2008年
5 丛红群;琥珀酸在大鼠海马CA1区对GABA能和Glu能神经递质系统的调制作用[D];青岛大学;2009年
6 叶新福;不同基因型稻米营养保健品质及其利用技术研究[D];福建农林大学;2009年
7 吴红海;吗啡依赖、戒断和复吸雄性大鼠相关区中神经甾体水平的变化[D];河北医科大学;2005年
8 李雪花;机械通气对新生猪神经系统的影响[D];复旦大学;2005年
9 郑艺梅;发芽糙米营养特性、γ-氨基丁酸富集及生理功效的研究[D];华中农业大学;2006年
10 赵晖;天麻有效成分组1210防治血管性痴呆的作用及机理研究[D];北京中医药大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 宋美英;γ-氨基丁酸对外侧缰核自发兴奋性突触后电流的节律性调节[D];吉林大学;2007年
2 孙宁;γ-氨基丁酸受体及转运体相关基因与偏执型精神分裂症的关联研究[D];山西医科大学;2007年
3 黄建韶;富含γ-氨基丁酸发芽糙米生产技术的研究[D];湖南农业大学;2003年
4 赵树平;乳杆菌发酵乳中ACE抑制活性和γ-氨基丁酸的研究[D];内蒙古农业大学;2008年
5 李泉;谷氨酸脱羧酶在急性脑型氧中毒中的快速变化[D];青岛大学;2005年
6 殷晓山;丘脑底核混沌电刺激对大鼠癫痫发作、脑电及皮层和海马γ-氨基丁酸的影响[D];福建医科大学;2005年
7 蒲云峰;硒对糙米发芽及其生物转化的影响研究[D];西南大学;2007年
8 梁兵;基于MRS在体检测γ-氨基丁酸的序列设计及程序实现[D];汕头大学;2007年
9 史小峰;曲霉型豆豉中GABA变化规律研究[D];西北农林科技大学;2008年
10 耿青青;长期递增负荷运动对大鼠氨基酸类神经递质的影响[D];华南师范大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 浩明;小茶叶变成大品牌[N];经理日报;2005年
2 邵建国;抗惊厥新药难续“金标准”辉煌[N];医药经济报;2010年
3 ;新型宠物用抗寄生虫药——米尔贝肟[N];中国畜牧兽医报;2008年
4 卫生部健康教育首席专家 赵霖;每天吃点酱豆腐能降脂[N];健康时报;2008年
5 丁香;孕妇和新生儿应慎用麻醉剂[N];中国医药报;2009年
6 北京同仁医院 张友平;左氧氟沙星的副作用及其预防[N];保健时报;2009年
7 程圣中;卫生部公布六种新资源食品[N];中国食品质量报;2009年
8 杨跃萍;云南选育出60余个防病功能水稻新品系[N];中国食品报;2009年
9 记者魏公铭;精深加工让糙米变美味[N];中国食品报;2010年
10 本报记者 王源;南瓜到底有没有降血糖作用(三)[N];科技日报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978