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扇贝裙边糖胺聚糖对过氧化氢损伤的血管内皮细胞保护作用的研究

高莹  
【摘要】: 目的:通过观察扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对过氧化氢(H_2O_2)损伤的血管内皮细胞的合成及分泌功能的影响,进一步探讨扇贝裙边提取物(ESS)抗动脉粥样硬化(AS)的作用机理。 方法:1、采用体外培养的方法,用人脐静脉内皮细胞株(HUVEC,ECV304),建立H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤模型。2、用噻唑蓝(MTT)法观察SS-GAG对不同浓度的H_2O_2损伤的血管内皮细胞增殖活性的影响。3、用化学比色的方法测定分析SS-GAG对H_2O_2损伤的血管内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放的影响。4、用酶促反应的方法测定内皮细胞内谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)的活性;用化学比色法测定内皮细胞内总的抗氧化能力(T-AOC),分析SS-GAG对H_2O_2诱导的内皮细胞氧化损伤后GSH-PX及T-AOC活性的影响。5、用黄嘌呤氧化酶法测定内皮细胞内的超氧化物歧化酶(SOD)的活性;用硫代巴比妥酸反应物(TBARS)法测定内皮细胞内氧化损伤产物丙二醛(MDA)的含量;分析SS-GAG对受损细胞的SOD活性及损伤产物MDA的含量影响。6、建立H_2O_2诱导的血管内皮细胞氧化损伤模型,用硝酸还原酶法测定SS-GAG对血管内皮细胞的血管内皮舒张因子—一氧化氮(NO)含量的影响;用化学比色法测定SS-GAG对血管内皮细胞的一氧化氮合酶(NOS)活性的影响。7、建立H_2O_2所致的血管内皮细胞氧化损伤模型,用放射免疫法测定内皮细胞合成分泌的前列环素(PGI_2)的稳定性代谢产物6-酮-前列环素F_(1α)(PGF_(1α))和血栓素A_2(TX A_2)的稳定性代谢产物血栓素B_2(TX B_2)的含量,分析SS-GAG对血管内皮细胞氧化损伤后的合成分泌功能的影响。8、用放射免疫法测定血管内皮细胞合成分泌的缩血管生物活性多肽-内皮素ET的含量,分析SS-GAG对H_2O_2诱导的血管内皮细胞氧化损伤后细胞的合成分泌功能的影响。 结果:1、H_2O_2在75、150、300、600、1500、3000、6000μmol/L浓度时对血管内皮细胞的增殖有明显抑制作用,H_2O_2的浓度与细胞增殖活性呈反比,H_2O_2的浓度越高,其抑制作用越强,二者有明显量效关系。2.SS-GAG对低浓度的H_2O_2(75~600μmol/L)引起的VEC损伤有一定对抗作用,尤其是对抗H_2O_275μmol/L时的作用显著(P<0.05);但在高浓度H_2O_2(1500~6000μmol/L)存在时,SS-GAG则进一步抑制细胞的增殖活性(P<0.05)。3、H_2O_2损伤组血管内皮细胞的LDH活性明显高于正常对照组;与损伤对照组比较,SS-GAG各保护组(50、100、200μg/ml)内皮细胞的LDH活性显著降低(P<0.01)。4、与正常对照组比较,损伤对照组细胞内GSH-PX活性及T-AOC明显降低(P<0.01);SS-GAG(50、100、200μg/ml)各保护组细胞内GSH-PX、T-AOC活力均明显高于损伤对照组(P<0.05,P<0.01)。5、与正常对照组比较,H_2O_2损伤组内皮细胞的SOD活性明显降低,MDA含量明显增加(P<0.01);SS-GAG各保护组(50、100、200ug/ml)与损伤对照组比较,SOD活性明显增强,MDA含量明显减少(P<0.01)。6、用SS-GAG(50、100、200ug/ml)预处理的各保护组与H_2O_2损伤对照组比较,其细胞内NO、NOS活性明显提高(P<0.01)。7、H_2O_2损伤组与正常对照组比较,细胞培养液中的PGF_1。水平明显降低,TX B_2的含量明显增加(P<0.01);SS-GAG在50、100、200ug/ml浓度时可逆转H_2O_2的作用,提高PGF_1水平,降低TX B_2含量(P<0.01)。8、H_2O_2的损伤组可使血管内皮细胞中的ET表达增强,SS-GAG(50、100、200ug/ml)保护组可显著降低受损细胞ET的表达(P<0.01)。 结论:扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)能逆转低浓度过氧化氢对内皮细胞增殖活性的抑制;并能增强受损的内皮细胞内SOD和NOS的活性;提高细胞内GSH-PX的活性和细胞的T-AOC;有效降低脂质过氧化代谢产物MDA的产生和LDH的漏出;明显增加内皮依赖性舒张因子NO和PGF_1。等舒血管物质的含量;显著降低TXB_2和ET等缩血管物质的分泌。 结果表明,扇贝裙边糖胺聚糖对过氧化氢所造成的血管内皮细胞的氧化损伤均有明显的保护作用。该作用在其防治动脉粥样硬化方面具有重要意义。


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