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Notch-1基因下调诱导GBM肿瘤干细胞肿瘤细胞凋亡的试验研究

王建鹏  
【摘要】: 目的应用RNA干扰技术(siRNA)介导GBM肿瘤干细胞Notch-1基因下调诱导肿瘤干细胞凋亡的研究。 方法实验采用无血清培养基诱导GBM肿瘤干细胞,同时对肿瘤干细胞分子标志CD133和nestine行免疫荧光鉴定;实验设以Notch-1为基因靶点的siRNA1、siRNA2、siRNA3实验组、GAPDH siRNA阳性对照组、非特异性无关序列siRNA阴性对照组和未转染siRNA的空白对照组,采用LepofectamineTM 2000二次转染方法将siRNA转移到细胞内。实时荧光定量PCR定量和Western blot分别在基因和蛋白水平检测siRNA对Notch-1基因表达的抑制作用;四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖活性;Annexin V/PI法进行凋亡分析。 结果(1)采用无血清培养TJ905细胞可以诱导出肿瘤干细胞球,肿瘤干细胞对CD133(?)nestine具有免疫反应活性;(2)采用LepofectamineTM 2000二次转染方法可以高效地将siRNA转移到细胞内,化学合成的siRNA明显抑伟Notch-1 mRNA的表达水平,空白对照组、阴性对照组、siRNA1、2、3转染组Notch-1 mRNA表达率分别为1.00±0.05,1.03±0.08,0.25±0.05,0.42±0.05 0.80±0.02,siRNA 1可以明显的下调Notch-1蛋白表达水平;(3) siRNA 1转染组MTT检测细胞增殖活性显著降低,Annexin V/PI法凋亡分析显示细胞凋亡明显增加。 结论化学合成的靶向Notch-1基因的siRNA可以显著的下调GBM肿瘤干细胞Notch-1基因和蛋白表达水平,肿瘤细胞增殖活性降低,细胞凋亡明显增加。为进-步进行胶质瘤的基因治疗研究奠定基础。


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