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纤溶酶对后发性白内障抑制作用的实验研究

程亚辉  
【摘要】:目的:随着显微手术技术及设备的不断完善,现代白内障囊外摘除术的许多并发症已经明显减少,后发性白内障(after cataract, AC)又称后囊膜混浊(posterior capsule opacification,PCO)已经成为这一手术最常见和最严重的并发症,严重影响白内障患者术后远期视力的恢复。因此,如何有效的预防PCO的形成已经成为迫切需要眼科学者解决的问题。迄今为止,其发病机制尚未完全阐明。近年来的研究表明,碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和纤维蛋白是参与PCO的形成的主要因子。纤溶酶通过对纤维蛋白的特异性降解从而诱导玻璃体后脱离,但是,其在PCO中的研究尚未见报道。本实验通过对新西兰大白兔行白内障囊外摘除术制造PCO动物模型。应用裂隙灯观察前房炎症反应、PCO的形成过程;应用光镜观察后囊膜上的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells, LECs)的形态以及纤溶酶对角膜、视网膜的影响;应用免疫组化半定量检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)在后囊膜上LECs的表达情况;应用ELISA技术检测术后房水中bFGF的含量。为探讨纤溶酶对PCO形成的抑制作用的机制以及其在临床应用提供理论依据和实验依据。 方法:清洁级健康4月龄新西兰大白兔20只,体重2.5-3.0kg,无眼部疾病。随机分成两组,即对照组和实验组。两组均在全身麻醉下行白内障囊外摘除术,术后对照组不给予任何处理,实验组给予5IU/ml纤溶酶0.2ml前房注射。术后给予妥布霉素/地塞米松眼水点眼6/日,一周后改为4/日,点三周停药。术后1天、3天、1周、2周、2个月进行眼部裂隙灯检查,观察并记录PCO的发生时间、程度、部位、形态及前房炎症反应和眼压,并抽取房水0.2ml采用ELISA技术以检测前房内bFGF的含量,2个月后空气栓塞处死并摘除眼球,将其固定于4%多聚甲醛溶液1周,石蜡包埋制成组织切片,HE染色,光镜下观察后囊膜上的LECs的形态以及纤溶酶对角膜、视网膜的影响;光镜下观察经免疫组化染色后增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)在后囊膜上LECs的表达情况。所得实验数据采用SPSS13.0统计软件分析。 结果:1前房炎症:白内障术后第1天两组所有术眼出现不同程度的前房炎症反应;术后第3天实验组有14眼仍存在前房炎症反应,对照组有19眼,实验组发生率较对照组低(P0.05);术后1周所有术眼前房炎症反应消失,对照组仍有6眼存在前房炎症反应;术后2周对照组所有术眼前房炎症反应消失。两组前房炎症反应消退时间:实验组为5.80±1.88天;对照组为8.90±3.53天,统计学上有显著性差异(P0.05)。 2术前、后眼内压的变化分析:实验组与对照眼术后不同时间点眼压值之间无显著性差异(P0.05),而手术前后不同时间点有差异,术前平均眼压值为23.46±2.46mmHg,与术后第1、3天的平均眼压值32.13±3.55 mmHg、26.67±2.79 mmHg相比较,统计学上有显著性差异(P0.05),而与术后第1、2、4周平均眼压值24.98±2.80 mmHg、23.39±2.82 mmHg、22.63±2.75 mmHg相比较,无显著性差异(P0.05)。 3 PCO的裂隙灯照相:实验组在术后2周开始出现PCO;对照组术后1周开始出现PCO。术后2个月时PCO发生率:实验组:I级5眼,II级4眼,11眼未出现PCO;对照组:I级7眼,II级5眼,III级6眼,2眼未出现PCO。PCO的发生率:实验组为45%,对照组为90%,统计学上有显著性差异(P0.01),在PCO发生的时间上:实验组平均为2月;对照组平均为1月,统计学上有显著性差异(P0.01);PCO的混浊程度评分:实验组为0.65±0.81、对照组为:1.75±1.02,统计学上有显著性差异(P0.01)。 4组织病理组织学:①后囊膜HE染色:实验组中央区后囊膜上LECs稀少,呈单层排列。对照组中央区和赤道部后囊膜上均可见多层增生的LECs以及大量的胶原纤维附着;角膜HE染色:两组角膜各层结构基本完整,可见散在内皮细胞脱落;视网膜HE染色:两组视网膜各层结构完整,神经节细胞大小一致,轮廓规则,细胞边界清晰。②免疫组化染色:细胞核染色为棕黄色黄褐色为阳性结果。实验组后囊膜可见单层着色,对照组后囊膜可见多层细胞染色。实验组IOD值平均为31.7±3.8,对照组IOD值平均为61.3±4.0,统计学上有显著性差异(P0.05)。 5 ELISA法测定前房房水中bFGF的含量:术后第1天、3天、7天、2周和1月,实验组前房内的含量为0.78±0.19ng/ml、0.38±0.12ng/ml、0.68±0.21 ng/ml、0.81±0.31 ng/ml、0.93±0.21 ng/ml,对照组前房内bFGF的含量为15.88±1.38 ng/ml、14.34±1.21 ng/ml、9.13±1.25 ng/ml、4.87±0.76 ng/ml、2.75±1.01 ng/ml。在术后1个月内,实验组前房内bFGF含量较对照组低;在术后2个月时,实验组为0.99±0.23ng/ml、对照组为1.11±0.32 ng/ml,两组比较无显著性差异(P0.05)。 结论: 1术后前房注射纤溶酶可以有效地减轻前房炎症反应并且促进炎症的恢复。 2纤溶酶可以降低前房内bFGF的含量。 3纤溶酶可以有效地降低PCO的发生率和延缓其发展速度。


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