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细丝蛋白A在结直肠癌中的表达及其与MMP-9的关联研究

孟令振  
【摘要】:目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率呈逐年增加的趋势。其发生机制目前仍不明确,目前认为是饮食、环境、遗传因素等多因素作用的结果,还有研究证实有些疾病也与结直肠癌的发病有关,例如:慢性炎症,病程较长的溃疡性结肠炎形成的肉芽肿就与结直肠癌的发生有密切的关系。结直肠腺瘤也容易发生恶变。家族性息肉病的恶变率几乎为百分之百。目前研究明确的为饮食和遗传因素,在经济发达区域,由于饮食结构发生改变,脂肪和蛋白质摄入较多,纤维素摄入减少,这都导致了这一区域的结直肠癌发病率升高;在家族中有癌症病史的后代患病几率较正常人群高。在结直肠癌的发生、发展以及转移过程中有多种机制参与其中,在众多因素中基质金属蛋白酶9(MMP-9)已被大量研究证实在肿瘤的发生、浸润和转移中发挥重要作用。目前关于FLNa与肿瘤发生、浸润和转移的关系研究很少,在结直肠癌方面就更少。本研究利用免疫组织化学法检测结直肠癌组织MMP-9和FLNa为基本方法,在此基础上探讨两者与结直肠癌患者发病的关系和两者之间的关系,并进一步采用RT-PCR法在转录水平加以验证,利用Western印迹法在蛋白水平加以验证。探讨MMP-9与FLNa在结直肠癌的发生、浸润以及转移中的关系。 方法: 1免疫组织化学法(SP法)检测MMP-9和FLNa在结直肠癌患者的正常肠粘膜组织与肿瘤组织中的表达,并进行统计分析,进而分析MMP-9与FLNa在肿瘤组织中的关系。 2采用RT-PCR法检测MMP-9和FLNa在结直肠癌患者的正常肠粘膜组织与肿瘤组织中的表达,进行统计学分析。 3采用Western印迹法检测MMP-9和FLNa在结直肠癌患者的正常肠粘膜组织与肿瘤组织中的表达,并进行性统计学分析。 4利用统计学分析MMP-9和FLNa在肿瘤组织中的表达与结直肠癌的患者年龄、性别以及肿瘤的TNM分期、大小、形态、肠壁浸润深度、部位、分化程度、淋巴结转移情况、肝转移和组织学类型等临床因素的关系。 结果: 1免疫组织化学(SP法)检测MMP-9和FLNa在结直肠癌患者的正常肠粘膜组织与肿瘤组织中的表达结果显示:MMP-9的阳性颗粒位于细胞质中,本实验60例结直肠癌患者的肿瘤组织的阳性表达56例,表达阳性率为93.33%;与之对照的是在正常肠粘膜组织的阳性表达19例,表达阳性率为31.67%。P0.05,差异有统计学意义;FLNa的阳性颗粒位于细胞质中。本实验60例结直肠癌患者的肿瘤组织的阳性表达为30例,表达阳性率为50.00%;与之对照的是在正常肠粘膜组织的阳性表达55例,表达阳性率为91.67%。P0.05,差异有统计学意义。Spearman检验的结果证实:MMP-9与FLNa在结直肠癌腺癌组织中的表达呈负相关(r=-0.339,P=0.0080.05)。 2 RT-PCR法检测MMP-9及FLNa在结直肠癌患者的正常肠粘膜组织与肿瘤组织中的表达结果显示:MMP-9 mRNA在肿瘤组织中的表达水平(0.84±0.02)比正常肠粘膜组织(0.21±0.01)高(P0.05,差异具有统计学意义),FLNa mRNA在肿瘤组织中的表达水平(0.24±0.03)比正常组织(0.95±0.04)低(P0.05,差异有统计学意义)。 3 Western印迹法检测MM-9和FLNa在结直肠癌患者的正常肠粘膜组织与肿瘤组织中的表达结果显示:MMP-9蛋白在结直肠癌组织中的表达水平(0.86±0.03)比正常组织(0.19±0.02)高(P0.05,差异有统计学意义),FLNa蛋白在结直肠癌组织中的表达水平(0.15±0.02)比正常组织(0.76±0.04)低(P0.05差异有统计学意义)。 4 MMP-9和FLNa的表达程度与患者临床以及病理因素间特征的关系经统计学分析显示:与肿瘤的TNM分期、肠壁浸润深度、淋巴结转移和肝转移具有相关性,但是与患者的年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、大小、形态和组织学类型等无关。 结论: 1 MMP-9和FLNa的表达程度与患者的年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、大小、形态和类型等无关。 2 MMP-9的表达程度越高的患者肿瘤的TNM分期越晚、肠壁浸润越深、淋巴结转移越多和有肝转移。 3 FLNa的表达程度越高的患者肿瘤的TNM分期越早、肠壁浸润越浅、淋巴结转移越少(或无)和无肝转移。 4在检测MMP-9与FLNa方面免疫组织化学法和RT-PCR以及Western印迹法结论一致。 5 MMP-9与FLNa在结直肠癌的发生和转移中的表达呈负相关。


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