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疏肝健脾方芍药苷含量测定与治疗肝郁脾虚型不孕症临床疗效观察

陈进成  
【摘要】:不孕症(Infertility)在已婚妇女中占有很高的发病率,并成为世界性的疑难病症,不孕症已经不仅仅是一个独立的疾病,而是许多妇科疾病的一种延伸。近几年不孕症的发生率呈显著的上升趋势,因此对不孕症的有效治疗研究则意义重大。目前临床不孕症大多与社会工作压力大,精神紧张以及起居失常、饮食不节等原因造成肾虚、肝郁或脾虚有关,其中肝郁脾虚型不孕症占之比例为最大。本课题采用吾师疏肝健脾经验方,针对肝郁脾虚型不孕症的疗效做为切入点,研究本方的疗效与不同配伍对芍药苷含量的影响。 第一部分疏肝健脾方及拆方配伍对芍药苷含量的影响研究 目的: 采用HPLC法测定疏肝健脾方及拆方配伍中芍药苷的含量。 方法: 采用高效液相色谱法(HPLC)建立测定疏肝健脾方、拆方配伍等不同组中芍药苷含量的方法学,即调整流动相的配比组成,摸索测定不同组中芍药苷含量的最佳色谱条件。并进行色谱条件系统性实验如下。(1)绘制标准曲线:配制系列浓度的芍药苷对照品溶液,分别进样检测,按含量测定方法测定峰面积,以芍药苷的浓度为横坐标,测定的峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。(2)精密度试验:精密量取芍药苷对照品溶液,重复进样5次,在色谱条件下测定峰面积,测定实验的精密度。(3)重复性试验:精密量取同一组供试品溶液,平行进样5次,分别测定峰面积,计算实验的重复性。(4)稳定性试验:精密量取某一组供试品溶液,在24小时内于每隔一定时间将样品注入高效液相色谱仪,分别测定其峰面积。(5)回收率试验:采用加样回收率测定法,取已知含量的样品溶液,分别加入一定量的芍药苷标准对照品,所得样品分别进样,在上述色谱条件下测定峰面积,计算回收率。并在上述选择的最佳色谱条件下测定其峰面积,用外标法计算各组中芍药苷的含量。以检测白芍及白芍配伍健脾药白术、或茯苓,或肝经气分药柴胡、或肝经血分药当归对其芍药苷含量的影响,并与疏肝健脾方中芍药苷含量进行比较分析。 结果: 1不同配伍组中芍药苷含量的HPLC方法学的建立采用与临床上服药方法相一致的水提法制备待检溶液。(1)不同组分中芍药苷含量的HPLC测定色谱条件为:色谱柱为Diamonsic C18柱(5μm ,200×4.6 mm);紫外检测器,检测波长:230nm;流动相:甲醇-水(35∶65);流速:1.0ml/min;柱温:25oC;进样量:10μl;理论塔板数按芍药苷峰计算,应不低于2000。在此色谱条件下,测得的芍药苷色谱峰的保留时间约为10min,分离度大于1.5。(2)芍药苷在0.00974~0.05846mg/ml的浓度范围内线性关系良好,回归方程为y=12154x+11.435(R2=0.9997,n=5)。(3)精密度测得RSD值为0.22%(n=5) (4)本方法重现性良好,RSD值为0.088%(n=5)。(5)稳定性试验表明样品在24小时内稳定,RSD值为0.43%(n=6)。(6)芍药苷的平均回收率为99.47%,RSD值为0.52%(n=9),表明回收率较高,方法准确可靠。 2测定疏肝健脾方及拆方配伍中芍药苷的含量 采用高效液相色谱法(HPLC)检测芍药苷的含量,结果测定得出:单味药白芍组中芍药苷含量为19.49 mg/g,白芍与柴胡配伍组中芍药苷含量为28.48 mg/g,较单味药白芍组提高46.1%;白芍与当归配伍组中芍药苷含量为22.96 mg/g,较单味药白芍组提高17.8%;白芍与白术配伍组中芍药苷含量为23.68 mg/g,较单味药白芍提高21.5%;白芍与茯苓配伍组中芍药苷含量为17.76 mg/g,较单味药白芍组下降8.9%,但无统计学意义(P0.05)。疏肝健脾方中芍药苷含量为25.34 mg/g,较单味药白芍组提高30.0%(P0.05)。测定结果表明白芍配伍柴胡、当归、白术后,其芍药苷含量均较单味白芍组显著提高(P0.05);疏肝健脾方除外,白芍与柴胡组,均较其他各组有提高,但无统计学意义(P0.05)。 第二部分疏肝健脾方治疗肝郁脾虚型不孕症60例临床疗效观察 目的: 选择肝郁脾虚型不孕症的临床病例60例,给予疏肝健脾方治疗,采用前后自身对照的方法,观察其疗效,并探讨疏肝健脾方中芍药苷含量与临床疗效的相关性。 方法: 收集2008年至2009年河北省中医院专家门诊不孕症病例,包括继发性不孕和原发性不孕,经辨证属于中医肝郁脾虚型范畴入选60例。给予疏肝健脾方治疗,水煎温服,每日2次,分别于上午9~10点和晚上睡前半小时服,每次约200ml。以1个月经周期为一疗程,连续服药治疗3~6个周期。遵循中医理论整体观念,根据患者具体病症表现适当加减药物,如侧重肝郁者,加玫瑰花、薄荷、郁金等,以增强养肝散肝清肝三者并用之效;重在脾虚者,加党参、山药、甘松,焦三仙等,以增强健脾补土之用。观察指标:(1)观察临床症状如烦躁易怒、情绪泼动、时常乳房胀痛,食少纳呆、大便不规律,舌质淡红,苔薄白或白,脉象弦或弦细。(2)观察月经的期、色、质、量的变化。(3)生化指标于月经的第2天早晨空腹抽血,检测血清性激素六项水平。(4)B超监测于月经的第12~18天采用B超监测方式,监测子宫内膜厚度与卵泡发育情况。(5)在用药治疗1个周期后对月经周期延迟10日以上者进行尿检hCG,停经5周B超检测到胚芽和原始心管搏动,确定宫内妊娠、活胎。 结果: 1临床症状在连续治疗3个周期后60例患者的月经周期规律,情绪稳定,心情舒畅,饮食、起居规律,睡眠好;但侧重肝郁者,症状改善明显好于脾虚为主者,但无统计学意义。 2生化指标治疗3个周期后有55例患者血清性激素六项水平正常,或接近正常,雄性激素与雌性激素比例平衡协调;治疗6个周期后剩余5例中有4例患者血清性激素六项指标正常协调,1例PRL偏高。 3 B超检测治疗3个周期后,52例患者B超检测显示子宫内膜与卵泡发育良好,可检测到优势卵泡(卵泡直径≥18mm),且子宫内膜与卵泡的发育大小呈周期性变化;治疗6个周期后,除1例患者因一侧输卵管不通,每间隔一个月方能检测到优势卵泡(一侧排卵);1例患者治疗6个周期后,仍未检测到优势卵泡外,其余6例B超检测,显示可检测到优势卵泡。 4受孕情况连续服用疏肝健脾方治疗在第2个周期尿检HCG为阳性、B超显示宫内早孕者有6例;连续用药在第3~4个周期受孕者有29例;连续用药在第5~6个周期受孕者23例,总有效率为96%,2例激素水平趋于正常,但未受孕。 结论: 1应用高效液相色谱(HPLC)法所建立的测定不同配伍中芍药苷含量的方法,分离度、精密度和重现性良好,能够用于含有芍药苷成分的中药配伍及复方的含量测定。 2白芍配伍柴胡、当归、白术后,能提疏肝健脾方中芍药苷的含量,且明显高于单味药白芍组。推测芍药苷可能是疏肝健脾方治疗肝郁脾虚型不孕症的主要有效成分之一。 3疏肝健脾方对情志有一定的调节作用,且能很好的改善患者的月经周期、经色、经质、经量,以及与其相关的饮食、睡眠、排便等服药前不适症状。 4疏肝健脾方对肝郁脾虚型不孕症患者血清性激素六项水平有明显的改善和协调作用,如降低PRL,提高E2。对卵泡的发育有促进作用,能使子宫内膜的厚度与卵泡发育的大小变化趋于一致性,为着床奠定物质基础。 5疏肝健脾方对肝郁脾虚型不孕症有明显的治疗作用,其有效率达到了96%。疏肝健脾方对肝郁脾虚型不孕症的疗效与芍药苷含量有一定相关性。


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