收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

内毒素对人牙周膜细胞表达TLR2和TLR4的影响

段立立  
【摘要】:目的:Toll样受体(Toll- like receptors, TLRs)是天然免疫受体家族中的一员,主要存在于免疫细胞的表面。TLRs属于Ⅰ型跨膜受体及病原体的模式识别受体是白细胞介素-1受体超家族成员,可以识别病原体所特有的保守结构,这种保守结构被称为病原相关分子模式(Pathogen association molecular pattern, PAMP),例如内毒素(lipopolysaccharide, LPS)。宿主的炎症反应起始于TLRs对病原相关分子模式的识别,引起细胞内信号传导,从而引起细胞因子分泌,启动炎症反应。 越来越多的研究证实,TLR2和TLR4与牙周疾病的发生、发展密切相关,有着重要的临床意义。口腔内存在大量的细菌,牙周病是以革兰氏阴性厌氧菌为主的混合感染,内毒素是革兰氏阴性菌死亡破裂后由细胞壁外膜释放出的具有特殊结构的物质,是牙周致病菌的主要毒力因子,可穿过上皮进入深部的结缔组织。牙周膜细胞(Periodontal ligament cells, PDLCs)是牙周膜内的主要组织细胞,具有较强合成胶原的能力,对牙周组织健康的维持以及牙齿的稳固十分重要。 牙周膜细胞是否可以作为免疫细胞参与局部牙周免疫反应成为学者们关注的热点。本实验旨在探讨体外培养的人牙周膜细胞是否表达Toll样受体2和4,以及观察在不同的时间段内毒素刺激对牙周膜细胞表达TLR2和TLR4有何影响,以了解Toll样受体在牙周病中的免疫学作用。 方法: 1于临床上取得12-26岁患者因正畸拔除的双尖牙,无菌湿润条件下刮取根中三分之一的牙周膜组织,采用传统组织块法进行人牙周膜细胞的原代培养,运用第三代细胞进行免疫组织化学染色,通过波形蛋白和角蛋白染色鉴定细胞来源。 2选用第四代生长良好的处于对数生长期的牙周膜细胞,制成4×10~4/ml的单细胞悬液接种于96孔板内,每孔体积200 ul,共铺7板,每板复种三孔,并设未加细胞的孔调零,运用四唑盐比色法(Methlthazoletrazolium, MTT)绘制牙周膜细胞的生长曲线。 3、选用第四代生长良好的牙周膜细胞,以5×10~4∕ml的密度传代到底部放有圆形盖玻片的24孔培养板内,加入适量的高糖DMEM培养液,放入CO_2培养箱中培养,使培养板中的细胞均匀的贴壁生长并基本铺满盖玻片。弃原培养液,实验组用含10μg/ml内素素的DMEM培养液分别培养4、8、12和24 h,阴性对照组不加内毒素仅用DMEM培养,收集各组的细胞爬片,丙酮固定,运用免疫细胞化学染色法检测TLR2和TLR4在牙周膜细胞中的表达的量,从而观察内毒素刺激牙周膜细胞后对TLR2和TLR4表达的影响。 利用多功能真彩色细胞图像分析管理系统对染色标本进行图像分析,每张爬片随机选择5个高倍视野(×400),根据Soslow RA的评分方法进行免疫组化评分(Immunohistochemical score, IHS),分别计算TLR2和TLR4在各组的得分并进行统计学处理。 结果: 1成功培养人牙周膜细胞,原代培养的牙周膜细胞以组织块为中心呈放射状排列,倒置显微镜下见培养的细胞呈星形或长梭形,有两个到四个细胞突,胞体丰满,胞浆均匀,核圆形或卵圆形,核仁清晰,数量1-3个不等。 免疫细胞化学染色结果显示:体外培养的人牙周膜细胞均为抗波形丝蛋白染色阳性,阳性部位位于胞浆;抗角蛋白染色阴性。证实细胞来源于中胚层,符合成纤维细胞的生物学特性。 2第四代牙周膜细胞运用MTT法绘制生长曲线结果显示:牙周膜细胞生长曲线成典型的“S”形,经历了潜伏期、对数生长期和平台期三个生长阶段。 3免疫细胞化学染色方法检测牙周膜细胞在内毒素刺激下不同时间段TLR2和TLR4表达情况的结果显示:健康的牙周膜细胞少量表达TLR2和TLR4,经内毒素刺激后TLR2和TLR4表达的量明显增加,各个实验组染色强度均显著高于阴性对照组(P0.05),且随内毒素刺激时间的延长而染色增强,在内毒素刺激24 h后的表达达到峰值。免疫组化染色显示相同时间段下各个实验组的TLR2的表达均显著高于TLR4的表达(P 0.05)。 结论: 1成功培养人牙周膜细胞。 2正常人牙周膜细胞可少量表达TLR2和TLR4,LPS的刺激可上调TLR2与TLR4的表达,相同的检测时间段TLR2比TLR4表达较强。提示牙周膜细胞参与牙周局部免疫反应。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 周才进;陈明;邱志东;姚关兵;徐浩;;TLR4及其信号通路在阻塞性黄疸肝脏损伤中的作用研究[J];广东医学;2011年09期
2 杨关鑫;王芳;何萍;赵玉红;;依那西普对牙龈卟啉菌内毒素作用下原代培养牙周膜细胞影响的实验研究[J];口腔医学;2011年06期
3 李隽;胥春;郝轶;刘晓峰;;牵张应变作用下人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平的变化[J];上海口腔医学;2011年04期
4 王强;薛乐宁;张维;陆建云;陆文;林敏;王晓勇;;胃癌及癌前病变中TLR4的表达及与幽门螺杆菌感染的关系[J];江苏医药;2011年15期
5 徐婧秋;吴丽萍;;脂多糖和白细胞介素-1β对人牙周膜细胞中诱导型一氧化氮合酶表达的影响[J];华西口腔医学杂志;2011年04期
6 李昂;赵俊杰;郭宁;石建峰;饶国洲;魏虹;苟建重;;黄芩苷对人牙周膜细胞功能活性调节的实验研究[J];口腔生物医学;2011年02期
7 刘强;谢柳青;王振海;;TLR4介导HCV引起小胶质细胞IL-12和IFN-α分泌的实验研究[J];免疫学杂志;2011年08期
8 许彦枝;李娜;刘健;吴景景;杨凤英;罗冬青;;中药双黄补对人牙周膜细胞在玉米醇溶蛋白支架材料上黏附生长及增殖的影响[J];中国中西医结合杂志;2011年07期
9 张林;马骥;范颖;林庶茹;;紫癜方对ITP模型小鼠TGF-β_1和TLR_4表达的影响[J];辽宁中医药大学学报;2011年08期
10 厉鸥;王方明;;MyD88、TLR4和STAT3在肝细胞癌组织中的表达及意义[J];中国现代医学杂志;2011年09期
11 庞珊珊;乐颖影;;Toll样受体4对饥饿代谢的调控作用[J];中国基础科学;2011年03期
12 翟洪波;徐键;;TLR2和TLR4在原因不明复发性流产绒毛和蜕膜中的表达及其意义[J];医学研究杂志;2011年06期
13 邓存良;陈炘;盛云建;陈文;;灵芪蠲肝液对大鼠TLR4信号途径的影响[J];泸州医学院学报;2011年05期
14 刘翔;林漫鹏;吕建忠;林虹;;TLR2、TLR4、TLR5和TLR9在小鼠Hp感染模型中的表达[J];实用医学杂志;2011年13期
15 刘加强;刘洪臣;王懿;冯元;高辉;;高糖对人牙周膜细胞的生物学作用[J];上海口腔医学;2011年03期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 史亮;施生根;韩东;孙全梅;;人牙周膜细胞内一氧化氮对力学响应单细胞水平的动态研究[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
2 刘士有;白红敏;;一氧化氮对人牙周膜细胞增殖抑制作用的研究[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
3 李茵;温颖;郑东翔;梁海咏;朴文花;;机械应力对人牙周膜细胞炎症因子表达谱影响的分析[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
4 李隽;胥春;郝轶;张富强;;牵张应变作用下人牙周膜细胞形态及钙离子浓度变化的实验研究[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
5 李彦;牛忠英;汤楚华;;不同培养条件下胰岛素样生长因子-Ⅰ对人牙周膜细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
6 胥春;郝轶;马佳音;李静;谢明;张富强;;牵张应变作用下人牙周膜细胞凋亡相关基因的差异表达[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
7 贾骏;段嫄嫄;王忠义;张少锋;;新型复合电纺纤维支架的构建及其对人牙周膜细胞生长影响的体外研究[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
8 曹家麟;吴春明;朱小区;欧阳钦;苏林红;黄强;林丽;;二草清肝汤预处理对小鼠内毒素性肝损伤的作用及对肝脏TLR4表达的影响[A];第二十次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2011年
9 程千松;王兴兵;李来玲;汪健;孙自敏;;TLR2和TLR4活化对骨髓间充质干细胞支持造血功能的影响[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
10 尹晓琳;陈磊;刘颖;杨建岭;马翠卿;姚智燕;杨丽娟;魏林;;黄芪多糖通过增加TLR4表达增强膀胱上皮细胞的固有免疫反应[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王建明;TLR4信号转导通路活化在胃缺血再灌注损伤中的作用研究[D];昆明医学院;2010年
2 原工杰;孕激素受体在人牙周膜细胞中的表达及孕酮对细胞增殖和成骨分化影响的研究[D];第四军医大学;2010年
3 孙学刚;LPS受体介导的细胞激活的信号机制研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
4 王居平;TLR4乙酰化/甲基化修饰激活对炎症免疫的调节[D];浙江大学;2011年
5 彭欢;TLR4信号通路在胆囊癌中的表达及其作用机制的初步研究[D];第二军医大学;2011年
6 黄洁;TLR4受体在糖尿病大鼠冠状动脉功能变化中的作用及机制[D];第四军医大学;2010年
7 朱怡琦;胰腺癌与糖尿病的流行病学关系及TLR4蛋白表达的意义[D];复旦大学;2012年
8 张云飞;人牙周膜细胞在弹性牵张力作用下核心结合因子的表达[D];第四军医大学;2002年
9 王永军;TLR4在宫颈癌中的表达及相关功能研究[D];华中科技大学;2011年
10 华锋;纤溶酶原激活抑制物-1对急性肺损伤小鼠TLR4信号途径的影响[D];复旦大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 段立立;内毒素对人牙周膜细胞表达TLR2和TLR4的影响[D];河北医科大学;2011年
2 胡春艳;氯沙坦钾对腹膜透析大鼠腹膜纤维化组织中TLR4表达的影响[D];山西医科大学;2010年
3 姚安会;TLR4在脊髓挤压伤后的表达及作用[D];第四军医大学;2010年
4 姚安会;TLR4在脊髓挤压伤后的表达及作用[D];第四军医大学;2010年
5 张莉;连续肾脏替代治疗对急性肾损伤患者循环内皮细胞及TLR4的影响[D];兰州大学;2010年
6 衣菲;糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达的研究[D];中国医科大学;2010年
7 杨瑞虹;TLR4基因多态性与新疆维、汉民族支气管哮喘的关联研究[D];新疆医科大学;2010年
8 王芳芳;TLR4基因多态性及信号转导相关因子与军团菌感染的关系[D];山西医科大学;2011年
9 景雪峰;脑缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血后TLR4表达的影响[D];中国医科大学;2010年
10 李秀秀;益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠模型肾组织TLR4表达的影响[D];山西医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978