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高压电烧伤大鼠白细胞CD11c/CD18的动态变化及己酮可可碱和乌司他丁的干预作用

郑伟才  
【摘要】:背景:在前期高压电烧伤动物试验研究中,采用WX-9B型多部位微循环显微仪及微循环图像分析系统,观察动物的肠系膜、肠黏膜、软脑膜、肝脏、胰腺、肾皮质、胃黏膜、深筋膜等的微循环变化,不仅引起局部组织器官微循环紊乱,而且还引起远隔组织器官的微循环紊乱,从而导致全身性微循环障碍,并观察到毛细血管内血流减慢、白细胞沿壁翻滚及黏附、微白栓形成及红细胞聚集等现象。白细胞黏附是高压电烧伤后微循环障碍的重要变化之一,介导白细胞与血管内皮细胞黏附的主要黏附分子为细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和β2-整合素,其中β2-整合素包括淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1、CD11a/CD18)、巨噬细胞表面抗原-1(Mac-1、CD11b/CD18)、P150,95(CD11c/CD18)和αDβ2(CD11d/CD18)。前期实验研究发现,高压电烧伤大鼠血液中的可溶性细胞黏附分子-1(sICAM-1)、CD11b/CD18均增加,是白细胞与血管内皮黏附的重要原因之一。CD11c/CD18在高压电烧伤白细胞黏附过程中是否起作用,目前相关研究较少,为此我们设计了本次实验。 目的:通过观察高压电烧伤早期大鼠白细胞膜上CD11c/CD18表达的连续变化,进一步探讨高压电烧伤微循环障碍的机制,及己酮可可碱(PTX)和乌司他丁(UTI)对整合素家族中CD11c/CD18表达的干预,为高压电烧伤的临床治疗提供实验依据。 方法: 1实验动物分组:将成年健康SD大鼠(由河北医科大学实验动物中心提供,合格证编号786657,雌雄不拘,雌鼠未孕,体重280~360g)240只,随机分成四组,每组各60只,分别为假高压电烧伤组(对照组),高压电烧伤实验组(实验组)、高压电烧伤己酮可可碱治疗组(PTX干预组)和高压电烧伤乌司他丁治疗组(UTI干预组)。每一组又分6个时相,分别为电击前(T0)、电击即刻(15min)(T1)、伤后1h(T2)、2h(T3)、4h(T4)、8h(T5),每时相10只。各组分别编号后分笼饲养。 2实验前准备:对大鼠称重,并按编号记录在册。剃除大鼠左上肢、右下肢及胸部被毛。将大鼠置于室温(24~26)℃和湿度(35~45)%RH相对恒定的实验室中,保温、禁食、自由饮水,过夜。根据实验要求,配备实验药品浓度。 3模型复制:将麻醉成功的大鼠固定放置于高压输出电路之间,接通电源,调整变压器输出电压2千伏,电击三秒钟后断电,电极夹接触局部组织形成三度烧伤创面,大鼠躯体仍处于痉挛、僵直状态,心跳呼吸存在,高压电烧伤试验动物模型复制成功。对照组不通电致假伤,其他条件各组均相同。PTX干预组在电击后即刻(1分钟内)大鼠腹腔注射PTX(50mg/kg),UTI干预组在电击后即刻(1分钟内)腹腔注射UTI(2万单位/kg)。 4标本采集与处理:在不同的时相,将复制成功高压电烧伤大鼠模型麻醉后开胸,直视下心脏取血,收集1.5mL全血置于乙二胺四乙酸二钾(EDTA·K2)抗凝管,混匀。将标本去除红细胞,标记免疫荧光单克隆抗体,制成白细胞悬液待检。 5指标检测:采用流式细胞仪进行检测高压电烧伤早期不同时相白细胞膜上CD11c/CD18的阳性表达(%)。 6实验数据处理:应用SPSS13.0统计软件进行统计学分析处理,实验数据均以均数±标准差(x±s)表示,采用完全随机的三因素析因设计的方差分析(ANOVA),p<0.05为有显著性差异。 结果: 白细胞膜上CD11c/CD18的阳性表达变化: 1对照组内各时相白细胞膜上CD11c/CD18阳性表达无显著性差异(p>0.05)。 2实验组不同时相白细胞膜上CD11c/CD18阳性表达高于对照组和电前的水平(p<0.05);组内T0、T1、T2、T3、T4时相CD11c/CD18阳性表达逐渐增高,到T4时相表达最高;T5时相较T4时相低,相邻时相间比较有显著性差异(p<0.05)。 3PTX干预组不同时相白细胞膜上CD11c/CD18阳性表达高于对照组和电前的水平(p<0.05);组内T1、T2、T3、T4、T5时相CD11c/CD18阳性表达逐渐增高,到T5时相表达最高;相邻T1和T2、T2和T3、T4和T5时相间比较有显著性差异(p<0.05),而T3和T4时相间比较无显著性差异(P>0.05)。 4UTI干预组不同时相白细胞膜上CD11c/CD18阳性表达高于对照组和电前的水平(p<0.05);组内T1、T2、T3、T4时相CD11c/CD18阳性表达逐渐增高,到T4时相表达最高,T5时相较T4时相低;相邻T1和T2、T2和T3、T3和T4时相间比较有显著性差异(p<0.05);而T4和T5时相间比较无显著性差异(P>0.05)。 5实验组与PTX干预组比较:PTX干预组T3、T4、T5时相白细胞膜上CD11c/CD18的阳性表达低于实验组(p<0.05);而两组T1、T2时相间比较无显著性差异(P>0.05)。 6实验组与UTI干预组比较:UTI干预组T2、T3、T4、T5时相白细胞膜上CD11c/CD18的阳性表达低于实验组UTI干预组(p<0.05);而两组T1时相间比较无显著性差异(P>0.05)。 7PTX干预组和UTI干预组比较:两组T1、T2、T3、T4时相间CD11c/CD18的阳性表达比较无显著性差异(P>0.05);而两组T5时相间比较有显著性差异(p<0.05)。 结论: 1高压电烧伤可致大鼠血液中白细胞膜上CD11c/CD18的表达上调,增加了白细胞的黏附,在造成微循环障碍方面有重要作用。 2在高压电烧伤早期,乌司他丁和己酮可可碱都可下调白细胞膜上CD11c/CD18表达,从而抑制白细胞黏附,提高微循环灌注量,但两者在下调CD11c/CD18表达上无明显区别。


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