收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

GBS相关的Cj在豚鼠体内定植及病人结肠内Cj的分离

卢晓卫  
【摘要】:第一部分GBS相关的Cj在豚鼠体内定植的研究 目的: 1分离豚鼠胃肠道内的空肠弯曲菌; 2确定空肠弯曲菌在豚鼠体内定植的部位; 3研究空肠弯曲菌在豚鼠胃肠道不同部位的形态与生理变化。 方法: 1培养空肠弯曲菌:河北医科大学第二医院神经内科实验室-80℃冰箱冻存的空肠弯曲菌溶化后,取500ul菌液,加布氏肉汤培养基5-8ml,置于三气培养箱,在微需氧环境(O25%, CO210%, N285%),42℃条件下,培养24小时后,传代至哥伦比亚血培养基,相同培养条件培养24-48小时。 2鉴定空肠弯曲菌:采用空肠弯曲菌形态学、氧化酶试验、马尿酸钠水解试验、PCR等方法,鉴定空肠弯曲菌。 3实验动物分组:采用6周龄、体重均在250-350g的Hartley豚鼠,雌雄不限,共15只,随机分为实验组12只和对照组3只,实验组分为分离组、定植组各6只。 4给菌途径及浓度:复苏后的空肠弯曲菌在哥伦比亚血培养基上培养24-48小时,刮取细菌至布氏肉汤培养基,配制成3×108CFU/mL菌悬液,豚鼠禁食12小时不禁水,实验组取2mL菌悬液灌喂豚鼠,灌喂结束即给食水。对照组豚鼠取2ml布氏肉汤培养基灌喂,其他处理同对照组。 5解剖实验动物:饲养分离组豚鼠48小时、饲养定植组豚鼠7天,解剖豚鼠,称重后,用4%水合氯醛腹腔注射麻醉动物(10ul/g),心脏放血法处死。常规皮肤消毒后打开腹腔,无菌取胃肠道组织,胃部及盲肠取四个不同部位的标本,小肠和大肠每5-10cm取一个标本。 6胃肠道组织及胃肠道内容物的分离培养:取肠道组织长度为0.5cm左右加至布氏肉汤选择培养基5-8ml增菌,微需氧、42℃条件下培养24小时,传代至哥伦比亚血选择培养基,相同条件培养24-48小时,观察菌落形态,挑选可疑目的菌落,传代至哥伦比亚选择培养基纯化菌株。 7分离得到的细菌鉴定:采用空肠弯曲菌形态学、氧化酶试验、马尿酸钠水解试验、PCR等方法,鉴定空肠弯曲菌。 8胃肠道内容物的涂片、革兰染色:取0.5cm3胃肠道内容物,放于载玻片上,用无菌棉签涂片,革兰染色后,光学显微镜1000倍观察胃肠道各部位有无似空肠弯曲菌形态的细菌以及该细菌在胃肠道不同部位的形态变化,同时了解该胃肠道部位的内环境。 9统计能够分离出空肠弯曲菌的胃肠道部位及数量。 结果: 1分离组灌菌后48小时解剖豚鼠,培养胃肠道组织及内容物,在肠道各段分离得到空肠弯曲菌(见附表1)。 2定植组在灌菌7天后解剖豚鼠,培养胃肠道组织及内容物,在肠道各段分离得到空肠弯曲菌(见附表2)。 3对照组分别在灌布氏肉汤培养基后48小时、7天解剖豚鼠,培养胃肠道组织及内容物,培养的部位同分离组和定植组,未分离得到空肠弯曲菌。 4对照组胃肠道内容物涂片革兰染色,光学显微镜1000倍镜检,未观察到似空肠弯曲菌形态的细菌。 5灌菌后48小时解剖豚鼠,胃肠道组织涂片革兰染色,光学显微镜镜检,观察到似空肠弯曲菌形态的细菌;在不同胃肠道部位,不能分辨空肠弯曲菌的形态变化,尤其在盲肠和结肠部位细菌较多不易明确辨别空肠弯曲菌。 结论: 1清洁级健康豚鼠胃肠道内无空肠弯曲菌。 2给豚鼠灌喂空肠弯曲菌后,空肠弯曲菌能在豚鼠胃肠道内长期存活。 3胃肠道内容物直接涂片革兰染色,不能辨别空肠弯曲菌形态,空肠弯曲菌形态较细小,易被其他肠道细菌覆盖。 第二部分病人结肠内Cj的分离 目的: 1了解肠道造瘘病人瘘口排出物有无空肠弯曲菌; 2了解非腹泻、非吉兰-巴雷综合征人群中,造瘘瘘口排出物的空肠弯曲菌分离率是否高于非造瘘人群粪便标本空肠弯曲菌的分离率; 3距离盲肠越近的结肠瘘口排出物分离得到空肠弯曲菌的几率是否越大。 方法: 1标本来源:2011年9月至10月河北医科大学第二医院小儿外科临床诊断为先天性巨结肠3例患儿,造瘘口排出物或肛门排出粪便为标本。 2收集标本:无菌棉签收集患儿瘘口或肛门排出物,放入盛有5-8ml布氏肉汤培养基的西林瓶中,自排出物排出至放入西林瓶中时间在2小时以内。 3增菌:装有标本的西林瓶置于三气培养箱内,微需氧环境(O25%,CO210%, N285%),42℃条件下,增菌24小时。 4传代:接种环沾取增菌24小时的增菌液一环,采用分区画法,传代至哥伦比亚血平板,微需氧环境,42℃条件下培养24-48小时。 5纯化:观察哥伦比亚血平板生长细菌的形态,接种环挑取可疑单菌落至哥伦比亚血平板纯化细菌,每块平板挑取3个菌落,增加挑选目的菌株的阳性率。 6细菌的鉴定:.包括细菌菌落形态、革兰染色镜检、生化鉴定,必要时行分子鉴定。 7保存细菌:分离得到的细菌保存至-80℃冰箱。 结果: 13例病人瘘口排出物按照本次实验方法能分离得到细菌; 2经鉴定分离得到细小菌落的细菌马尿酸钠水解试验阳性,革兰染色镜检为革兰阳性球菌。 33例病人本次实验方法未分离得到空肠弯曲菌。 结论:本实验方法不适合结肠造瘘病人空肠弯曲菌的分离培养。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王素珍,张新学,王辛,宋静,王志刚;胎儿弯曲菌空肠亚种分离鉴定初步报告[J];陕西医学杂志;1983年12期
2 陈亢川;林业杰;陈光华;程发稷;;从鸡与猪中检出空肠弯曲菌[J];福建医药杂志;1983年03期
3 张纪领;;华北煤炭医学院微生物学教研室、传染病学教研室首次从婴儿粪便中分离出空肠弯曲菌[J];中国综合临床;1984年06期
4 刘明欣;张更荣;周全生;马忠民;李建伟;;一种简单易行的空肠弯曲菌的保存方法[J];河南预防医学杂志;1984年04期
5 张广业;高生兰;;兰州地区鸡带空肠弯曲菌的调查[J];中国公共卫生;1987年01期
6 ;空肠弯曲菌不耐热肠毒素的检测[J];中国人兽共患病杂志;1988年04期
7 侯凤琴,沈宝铨,孙新婷;200株空肠弯曲菌对30种抗生素敏感性研究[J];医师进修杂志;2001年03期
8 栗克喜;;空肠弯曲菌自身凝集反应活性的检测和特性[J];国外医学(微生物学分册);2002年04期
9 刘怀军,陈薇,刘瑞春,李春岩,李林芳,王勇;空肠弯曲菌感染后中枢神经系统病变动物模型的初步研究[J];脑与神经疾病杂志;2005年01期
10 潘祖安,杨少娟;弯曲菌肠炎[J];广东医学;1984年07期
11 张京海,张意仲,吴采菲,魏燕玲;空肠弯曲菌共同抗原的提取及应用:SPA协同凝集试验快速检测空肠弯曲菌的实验研究[J];中国人兽共患病杂志;1988年04期
12 李惠光;于美玲;姜冬春;候荣伟;;从腹泻患儿粪便中检出空肠弯曲菌[J];微生物学杂志;1993年02期
13 刘刚;空肠弯曲菌菌种的保存方法[J];中国卫生检验杂志;2001年02期
14 顾志学;王焕妞;田德华;董香萍;盛伟华;;空肠弯曲菌耐热性肠毒素的初步研究[J];江苏医药;1984年09期
15 吴芝汉;王雨文;王璋雄;魏为兴;;金山县人群、动物空肠弯曲菌感染率冬季调查报告[J];上海医学;1984年12期
16 沙正常;增菌培养基分离空肠弯曲菌效果的比较[J];国际检验医学杂志;1985年06期
17 戴昌芳;;胎儿弯曲菌空肠亚种在肉和熟食品中的存活和生长[J];华南预防医学;1985年02期
18 王继舜;康菊珍;崔龙秀;;从鸡粪标本中分离37株空肠弯曲菌[J];兰州大学学报(医学版);1986年01期
19 康志清;空肠弯曲菌致病性的研究现状[J];中国综合临床;1987年03期
20 林业杰,陈亢川;福建省家禽、家畜空肠弯曲菌群感染情况及血清型分布[J];中国人兽共患病杂志;1988年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 叶秀娣;谢强敏;陈季强;卞如濂;;8805化合物对豚鼠咳嗽反射的影响[A];第七届中国抗炎免疫药理学术会议论文摘要集[C];2000年
2 耿兴超;霍艳;张琳;沈连忠;李波;;肝素钠临床不良反应样品的豚鼠全身主动过敏试验研究[A];中国毒理学会第五次全国学术大会论文集[C];2009年
3 张洪春;晁恩祥;孙蓉;;调补肺肾法对实验性豚鼠弹性酶肺气肿模型的影响[A];全国中医内科肺系病第十四次学术研讨会论文集[C];2010年
4 徐峰;张洪泉;;白细胞介素-1受体拮抗剂拮抗豚鼠哮喘的相关机制[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
5 薛涛;邱建华;黄维国;刘顺利;;骨形成蛋白在正常豚鼠中耳粘膜的表达定位[A];中华医学会全国中耳炎专题学术会议论文汇编[C];2004年
6 徐辉;冷静;沈彤;朱启星;;三氯乙烯致敏豚鼠肝脏MDA含量和SOD活力的测定[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
7 李淑荣;赵玉珍;张连巍;雷建章;;透射电镜对豚鼠内耳螺旋器毛细胞的研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
8 倪斌;沈振亚;;胸腺修饰和全身照射预处理受体对大鼠抗豚鼠天然抗体产生的影响[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
9 刘昀;康志敏;周建;蒋春雷;;快速灌流固定豚鼠肺组织石蜡制片探讨[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年
10 李涛;;金茵颗粒抗豚鼠胆囊炎的实验研究[A];中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 胡萍;透镜诱导豚鼠眼屈光状态的改变及豚鼠近视眼巩膜中MMP-2、TIMP-2和生长因子变化的研究[D];山东大学;2004年
2 殷泽登;硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠耳蜗细胞变性及蜗神经背核神经元和突触可塑性的时序性和机制研究[D];华中科技大学;2010年
3 贺小英;电针背六穴对哮喘豚鼠模型气道重构的干预机制研究[D];广州中医药大学;2006年
4 郝智慧;新型β_2肾上腺素受体激动剂SPFF对映异构体抗哮喘作用及作用机理的比较研究[D];沈阳药科大学;2007年
5 叶新民;豚鼠病毒感染性咳嗽模型的建立及其神经源性炎症机制探讨[D];广州医学院;2010年
6 冯永嘉;空肠弯曲菌粘附蛋白基因工程疫苗的实验研究[D];重庆医科大学;2003年
7 束晓梅;空肠弯曲菌galE基因变异株的临床意义研究[D];重庆医科大学;2004年
8 向淑利;neuB1基因失活空肠弯曲菌突变株的构建及其临床意义[D];重庆医科大学;2004年
9 高玉兴;空肠弯曲菌脂多糖成分对周围神经致病机理研究[D];重庆医科大学;2001年
10 吴彩琴;内淋巴积水豚鼠前庭器的形态变化及外膜半规管力学建模与分析[D];复旦大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 卢晓卫;GBS相关的Cj在豚鼠体内定植及病人结肠内Cj的分离[D];河北医科大学;2012年
2 朱晓冉;豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流和动作电位在生长发育过程中的变化[D];河北医科大学;2010年
3 杨蕴天;天龙粉对实验性自身免疫性肌炎豚鼠模型的影响[D];吉林大学;2005年
4 徐慧颖;C型钠尿肽对豚鼠胃窦平滑肌细胞延迟整流钾电流的影响[D];延边大学;2005年
5 王力军;窄谱中波紫外线及其联合中药治疗白癜风的临床及实验研究[D];南京中医药大学;2004年
6 俞进;α-甘草酸对豚鼠肾11β-羟基类固醇脱氢酶活性的影响[D];浙江大学;2003年
7 卞英伟;表皮生长因子对豚鼠慢性鼓膜穿孔愈合的影响[D];大连医科大学;2005年
8 田永胜;组织工程鼓膜的研制与在鼓膜修补中应用的实验研究[D];第四军医大学;2005年
9 曹亚菲;贝他根滴眼液对豚鼠形觉剥夺性近视形成的影响[D];郑州大学;2007年
10 谢小娟;放射性豚鼠咽鼓管损伤的初步研究[D];广西医科大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 雷晓燕 尚雄;80后大学生当起“豚鼠公主”[N];丽水日报;2010年
2 丁永明;抑郁的猴子和自闭的豚鼠[N];大众科技报;2003年
3 曾繁玉;“格林—巴利”研究有进展[N];健康报;2002年
4 本报记者 李涛;乐活CJ:在韩国 同在中国[N];中国食品安全报;2011年
5 曾繁玉;格林-巴利综合征分子研究有重大突破[N];中国医药报;2002年
6 本报记者 刘晖;投影领域的“金豚鼠”[N];计算机世界;2002年
7 周密 新华社特稿;以色列医院:拿病人当“豚鼠”做实验[N];新华每日电讯;2005年
8 惠正一;一夜卖40辆宝马 东方CJ挑战传统渠道[N];第一财经日报;2009年
9 记者 柴桂清;市领导会见韩国CJ集团客商[N];朝阳日报;2010年
10 史先振;为保护豚鼠“权益”,不惜毁墓盗尸[N];新华每日电讯;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978