Ag（Ⅲ）化学发光分析新方法建立及其在法医毒物分析中的应用研究

【摘要】：化学发光分析是近年来迅速发展的一种高灵敏的微量和痕量分析技术,以其灵敏度高、线性范围宽、仪器设备简单和容易实现自动化等优点,而成为分析化学中一个十分活跃的研究热点。化学发光检测方法与流动注射技术、毛细管电泳分离技术相结合,可用于环境与生物样本中微量组分的的分离与测定。近年来,化学发光技术已成为毒物与药物分析领域的研究热点之一。在前期的研究工作中,我们首次报道了Ag(III)配合物-鲁米诺化学发光新体系。本文对Ag(III)配合物-鲁米诺化学发光新体系在法医毒物分析中的应用进行了探讨,主要内容如下： 第一部分、 Ag(III)化学发光-流动注射分析新方法的建立。 1)根据多巴胺在碱性溶液中具有显著增强Ag(III)配合物-鲁米诺体系化学发光信号的特性,建立了流动注射-化学发光法测定注射液中多巴胺的新方法。在优化的实验条件下,多巴胺检测限达到3.0×10-11M,线性范围1.0×10-10～4.0×10-8M。对1.0×10-8M的多巴胺平行测定13次,相对标准偏差为2.3%。方法成功用于市售多巴胺注射液的测定。通过对化学发光光谱的研究和自由基捕获实验,对该化学发光反应的机理进行了研究。 2)基于氯胺酮在碱性溶液中具有显著增强Ag(III)配合物-鲁米诺体系化学发光信号的特性,建立了流动注射-化学发光法测定注射液中氯胺酮的新方法。在优化的实验条件下,氯胺酮检测限达到0.05mg／L,线性范围0.1～2.5mg／L。对浓度为0.5mg／L的氯胺酮溶液进行11次平行测定的相对标准偏差为1.9%。方法成功用于氯胺酮注射液的测定。 第二部分、Ag(III)化学发光-毛细管电泳分离分析新方法的建立。 1)尿液中儿茶酚胺类神经递质的含量在法医学上对于反映创伤性应激具有重要意义。基于肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺在碱性介质中对Ag(III)配合物-鲁米诺体系化学发光信号的增强效应,建立了毛细管电泳—化学发光法分离检测尿液中3种儿茶酚胺类神经递质的新方法。分离所用缓冲溶液为20.0mM的硼砂和1.0mM鲁米诺,8min内实现3种物质的基线分离。在优化的实验条件下,肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺的检出限分别达到7.9×10-8M,1.0×10-7M和6.9×10-8M。RSD为4.7-5.4%(n=5)。方法成功用于26位嗜铬细胞瘤患者尿液中和12名正常人尿液中儿茶酚胺类神经递质的检测。 2)基于氯胺酮在碱性介质中对Ag(III)配合物-鲁米诺体系化学发光信号的增强效应,建立了固相萃取-毛细管电泳—化学发光法分离检测尿液中氯胺酮的新方法。分离所用缓冲溶液为5.0mM的硼砂和2.0mM鲁米诺。在优化的实验条件下,氯胺酮检出限为1×10-7M。方法成功用于尿液中氯胺酮的检测。 3)基于沙丁胺醇、硫酸特布他林和莱克多巴胺在碱性介质中对Ag(III)配合物-鲁米诺体系化学发光信号的增强效应,建立了固相萃取-毛细管电泳—化学发光法分离检测这3种“瘦肉精”的新方法。分离所用缓冲溶液为1.0mM硼砂+15mMNaOH+2ppm SDS+1.OmM鲁米诺,8min内实现3种物质的基线分离。在优化的实验条件下,沙丁胺醇、硫酸特布他林和莱克多巴胺的检出限分别达到2.5mg/L,0.75mg/L和5.0mg/L,RSD为3.28%～4.5%(n=11)。方法成功用于动物饲料添加剂和兔尿中沙丁胺醇、硫酸特布他林和莱克多巴胺的检测。 4)在碱性介质中,罂粟碱能显著增强Ag(III)-鲁米诺化学发光体系的化学发光,且发光强度与样品浓度在一定范围内呈良好的线性关系。在优化的化学发光和电泳条件下,罂粟碱最低检测限为30.0mg／L。线性范围0.4～8.0g/L。对6.0g／L的罂粟碱进行平行测定5次,相对标准偏差(RSD)为4.3%(n=5)。方法成功用于盐酸罂粟碱注射液和强力枇杷露中罂粟碱含量的测定。 第三部分、氯胺酮急性致死大鼠组织样品预处理及体内分布研究初探。 取雄性Wistar大鼠16只,随机分成两组,分别以2LD50(894mg/kg)和4LD50(1788mg/kg)剂量给大鼠灌胃,建立大鼠氯胺酮灌胃给药致死模型,并考察氯胺酮致死大鼠体内死后的分布规律。待呼吸和心跳全部消失时,迅速解剖大鼠,取外周血、心脏、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉组织冷冻保存,以高效液相色谱法测定氯胺酮含量。测得2LD50组氯胺酮含量为：脑肝肾肺、脾、肌肉、心、外周血；测得4LD50组氯胺酮含量为：脑肾肝肺、脾、外周血、心、肌肉。实验结果显示氯胺酮广泛分布于死后大鼠体内和血液中,脑、肝和肾含量最高,提示法医鉴定时应合理采取检材进行毒物分析。