收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

大鼠脑创伤后NOS对海马神经细胞及学习和记忆影响的实验研究

宋朝彦  
【摘要】: 研究目的:复制大鼠重型颅脑创伤Marmarou模型。探讨大鼠脑创伤(TBI)后神经元型和诱生型一氧化氮合酶(NOS)在大鼠脑内表达情况,由此催化产生的大量一氧化氮(NO)对脑产生的毒性作用及其机理。探讨大鼠TBI后海马CA1区神经细胞坏死和凋亡与NO及NOS的关系,海马损伤对大鼠空间学习和记忆功能所造成的影响。探讨联合应用神经元型一氧化氮合酶(nNOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-NI)和诱生型一氧化氮合酶(nNOS)抑制剂氨基胍(AG)对脑的保护作用可能机制。以期为临床治疗提供理论依据和开拓新的治疗前景。 方法:本实验用250只体重350g-400g雄性Wistar大鼠随机分成①对照组,②创伤组,③AG治疗组,④7-NI治疗组,⑤AG和7-NI联合治疗组。每组又分别划分为伤后1hr、3 hr、6 hr、12 hr、1d、3d、7d、14d等8个时相组,对照组每个时相点4只大鼠,其余各组每个时相点5-6只大鼠。按照Marmarou方法,用重450g,直径18mm的铜棒从1.5m高度自由落下击中大鼠头部,造成大鼠重型闭合性颅脑创伤。各组分别在规定的时间点处死大鼠,经心前固定,断头取脑置于 4%多聚甲醛的0.1M 磷酸缓冲液中4℃下行后固定24小时,常规脱水、石蜡包埋,对前囟后3.3-4.3mm之间的大脑部分进行冠状面连续切 WP=4 片,厚度约7μm,经二甲苯脱蜡及酒精梯度至水。切片标本分别进行下列染色:①HE染色;②尼氏体染色;③nNOS、iNOS和caspase-3免疫组织化学染色;④原位细胞DNA断裂检测(TUNEL);⑤nNOS、iNOS和caspase-3免疫组化分别与TUNEL双染色。大鼠学习和记忆功能在伤后11天、12天、13天、14天采用Morris水迷宫测试。nNOS、iNOS和caspase-3免疫组化阳性细胞免疫反应性的强弱用真彩色图象分析系统定量分析测定以光密度(OD)值的来表示。实验中所得数据均用(x±s表示,用SPSS10.0统计软件进行单因素方差分析及SNK方法两两比较及相关分析。以单侧P≤0.05为差异在统计学上有显著性意义。 结果:大鼠致伤后多数短暂呈去大脑状态及呼吸抑制。多数大鼠蛛网膜下腔可见出血或黄染,顶叶打击区有散在脑挫裂伤改变,脑实质内部分有散在血肿。HE染色可见创伤后大鼠大脑皮质伤后6小时即出现散在变性坏死神经元,伤后1天达高峰,海马区病变较轻,伤后7天及14天有不同程度的缓解。尼氏体染色伤后1天,上述部位神经元胞浆中尼氏体均减少,3天时进一步减少,部分神经元尼氏体消失,7天及14天上述各种神经元中尼氏体有一定程度的恢复但仍较对照组为弱。上述观察结果与Marmarou所描述的模型伤后表现大致相符。 创伤组nNOS免疫反应性在伤后1小时开始升高,6小时达高峰, 24小时明显下降7到14天一直持续低水平但仍较对照组略高;AG治疗组免疫反应性在伤后1小时开始升高,6小时达高峰比创伤组增高明显(P0.05) WP=5 且高峰期延长到12小时24小时下降;7-NI治疗组及AG和7-NI联合治疗组与创伤组无明显差别。 创伤组iNOS免疫反应性在伤后6小时开始升高,3天达高峰,7天下降,14天仍有阳性反应;AG治疗组iNOS免疫反应性在伤后在伤后6小时开始升高,3天达高峰比创伤组稍低,7天下降,14天仍有阳性反应;7-NI治疗组及AG和7-NI联合治疗组3天达高峰比创伤组低(P0.05)。 创伤组caspase-3免疫反应性在伤后3小时开始升高,3天达高峰,7天下降,14天仍有阳性反应。各治疗组caspase-3免疫反应性的时程与创伤组基本一致,但与创伤组相比蛋白免疫反应性均有不同程度的降低。大鼠TBI后海马CA1区神经细胞的死亡以TUNELⅡ型阳性细胞居多。创伤组伤后3小时,海马CA1区即出现少量TUNEL阳性细胞,伤后6及24小时TUNEL阳性细胞数量逐渐增多,于伤后3天达高峰,伤后7天TUNEL阳性细胞数量下降,伤后14天仍高于对照组。各治疗组TUNEL阳性细胞的时程与创伤组基本一致,但阳性细胞数量与创伤组相比均有不同程度的减少。 创伤组在12小时之前同一细胞中TUNEL染色与nNOS免疫染色共阳性的细胞较多;伤后6小时TUNEL染色与iNOS免疫染色共阳性的细胞较多;TUNEL染色与caspase-3免疫染色在TBI后共阳性的细胞始终较多。在7-NI治疗组中TUNEL染色与nNOS免疫染色共阳性的细胞较创伤组减少。在AG治疗组中TUNEL染色与iNOS免疫染色共阳性的细胞较创伤组明显减少。 WP=6 在水迷宫测试中创伤组大鼠比对照组大鼠寻找到安全岛的潜伏期明显延长(第14天P0.01)各治疗组伤后潜伏期有不同程度的缩短。 伤后1至12小时各组海马CA1区nNOS免疫反应强弱与TUNEL阳性细胞数多少相关(r=0.913)。伤后6小时各组海马CA1区iNOS免疫反应强弱与TUNEL阳性细胞数多少相关(r=0.966)。各组海马CA1区TUNEL阳性细胞数多少与caspase-3免疫反应强弱相关(r=0.924)。各组海马CA1区TUNEL阳性细胞平均总数多少与大鼠水迷宫实验潜伏期平均总和长短相关(r=0.982)。 结论:1、大鼠TBI后海马CA1区神经细胞死亡存在坏死和凋亡两种方式,其中以凋亡居多。2大鼠重型颅脑创伤后nNOS和iNOS的过度表达及活性增加所导致NO的大量产生,对大脑神经组织起了毒害作用,导致大脑海马大量神经元坏死和凋亡。3在NO导致的海马神经元坏死和凋亡过程中caspase-3扮演着重要角色。4大脑海马CA1区大量神经元坏死和凋


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 舒斯云 ,包新民 ,李胜修 ,牛东滨 ,徐重 ,邹飞 ,李耀宇 ,张魁华 ,曾建新 ,吴文龙 ,刘永红 ,杨文科;哺乳动物脑纹状体内一个与学习和记忆有关的新区-边缘区[J];解剖学研究;1999年01期
2 赵雅宁;吴晓光;李建民;陈长香;饶颖臻;李淑杏;;中药补阳还五汤对沙鼠脑缺血再灌注损伤及微循环障碍的治疗作用[J];四川大学学报(医学版);2010年01期
3 陈世铭,王忠孝,包尔基;樟柳碱对动物学习和记忆的促进作用[J];中国药理学与毒理学杂志;1990年01期
4 张文平;苏林梁;仇玉兰;郑金平;张策;;乙酰胆碱对大鼠海马学习和空间记忆的影响(英文)[J];山西医科大学学报;2008年11期
5 刘燕强,顾景范;学习和记忆的神经生化学机制的研究概况[J];生理科学进展;1998年03期
6 王发强 ,刘庆安 ,马全福 ,钱令嘉 ,李培进 ,吴淑庆;应激对大鼠学习和记忆能力的影响[J];中华神经科杂志;2003年01期
7 张蔚婷,罗非,韩济生;更聪明的小鼠!?[J];生理科学进展;1999年04期
8 晏勇,吕洋,晏宁;学习和记忆的影像学研究进展[J];中华神经科杂志;2003年05期
9 李利娟;李宏霞;吴欣桐;鄢波;周东;;栀子甙对血管性痴呆大鼠行为学和脑组织病理改变的影响[J];四川大学学报(医学版);2009年04期
10 孟凡涛;倪荣军;张智;赵君;刘雅静;周江宁;;抑制雌激素的生物合成会引起C57BL/6J卵巢摘除小鼠的轻微焦虑样行为(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2011年04期
11 毛慕华,刘宗生;神经肽研究中若干问题的讨论[J];井冈山医专学报;1996年04期
12 王丽文,李国华;学习和记忆的计算神经生物学模型[J];锦州医学院学报;1997年04期
13 张盛洪,翁子晋,庄婷婷,唐侨飞,佘伟萍,林明栋,刘述;混合有机气体对小鼠学习记忆的影响[J];解剖学研究;2004年02期
14 侯秀娟,唐启盛,司银楚,胡京红,洪庆涛;脑卒中后抑郁状态模型大鼠学习和记忆水平的Morris水迷宫测定[J];中国临床康复;2005年12期
15 韦耀东,郝耀欣,梁艳华,缪永波,蒋启娟;实验性铅中毒对大白鼠学习和记忆的影响[J];右江民族医学院学报;2005年02期
16 王增贤;王晓亚;王怀经;李振中;王越;邢子英;;音乐对大鼠学习和记忆及海马NMDA受体表达的作用(英文)[J];泰山医学院学报;2007年05期
17 罗勇;聂晶;龚其海;陆远富;吴芹;石京山;;长期经口摄入铝对大鼠空间辨别学习记忆的影响[J];毒理学杂志;2008年01期
18 方崇仪,田联明,欧阳三,韩小文;海马结构与大白鼠避暗行为的学习和记忆 Ⅰ.广泛的电损毁海马背部的影响[J];基础医学与临床;1983年04期
19 王增贤,王晓亚,王怀经,李振中,王越,邢子英;音乐对大鼠学习和记忆以及海马NMDA受体表达的影响[J];第四军医大学学报;2004年24期
20 李建民;陈长香;赵雅宁;王大永;朱军;付爱军;刘清军;;川芎嗪对沙鼠前脑缺血-再灌注损伤后学习记忆的影响[J];河北医药;2010年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄强;戴伟民;揭园庆;聂俊;王小芳;胡永亮;余小明;宋光太;吴来德;金涛;;急性颅脑创伤患者院前及急诊救治现状分析[A];2011年浙江省神经外科学学术年会论文汇编[C];2011年
2 杨楠;宁亚蕾;戴双双;周元国;;小鼠颅脑创伤急性期的脑脊液谷氨酸浓度监测[A];重庆市生物化学与分子生物学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
3 谢捷如;钱志余;邓宁堃;杨天明;李韪韬;胡光霞;;基于功能近红外光谱参数的颅脑创伤实时监测研究[A];中国光学学会2011年学术大会摘要集[C];2011年
4 袁宜荣;李平根;黄国兵;谢德斌;伍伟俊;贺建雄;;颅脑创伤致精神障碍186例临床报告[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年
5 滕进忠;杨绮帆;;颅脑创伤后促醒高压氧介入的时效性研究[A];首届全国脑外伤治疗与康复学术大会论文汇编(下)[C];2011年
6 李葆明;;大脑如何记忆[A];中国生理学会2002年生理学新进展研讨会和计算机实验信号处理技术讲习班资料汇编[C];2002年
7 刘慧莉;时利德;;有氧运动对APP/PS1转基因小鼠学习和记忆及海马LTP的影响[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
8 刘能保;廖敏;张敏海;;慢性捆绑应激损伤大鼠学习和记忆的免疫组织化学和神经解剖学研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
9 季今朝;;海马CA1区β-受体在学习和记忆中的作用[A];中国生理学会张锡钧基金会第八届全国青年优秀生理学学术论文综合摘要[C];2003年
10 何宏文;黄芳;朱继红;刘宇;成家茂;;磨牙缺失对老年大鼠扣带回神经元数量和胆碱能纤维密度的影响[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王雪原;急性颅脑创伤患者脑脊液差异蛋白质组学研究[D];天津医科大学;2011年
2 董凤菊;急性颅脑创伤后低糖皮质醇血症的观察及临床意义[D];天津医科大学;2012年
3 廖凯;嗅觉刺激对学习和记忆的影响及其机制的研究[D];华中科技大学;2011年
4 张靓;运动与动脉粥样硬化:一氧化氮的作用及机制研究[D];华东师范大学;2003年
5 高明奇;急、慢性铅暴露引起仔鼠海马NMDAR亚单位、[Ca~(2+)]_i、凋亡的变化与学习记忆损伤的关系[D];中国医科大学;2004年
6 林欣;颅脑创伤后脑红蛋白表达变化的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年
7 陶美凤;两个Ⅰ型聚酮合酶功能结构域在异源宿主的表达[D];华中农业大学;1999年
8 侯秋玲;海马SNAP-25和α_2受体在学习与记忆中的作用[D];复旦大学;2005年
9 孙炜;一氧化氮合酶抑制剂对关节软骨修复组织的影响[D];第一军医大学;2001年
10 范延红;iNOS基因表达调控鼠CFs增殖和胶原合成的作用及其信号转导机制的研究[D];第四军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 宋朝彦;大鼠脑创伤后NOS对海马神经细胞及学习和记忆影响的实验研究[D];河北医科大学;2003年
2 潘昊;膀胱移行细胞癌中一氧化氮合酶的表达及其与微血管密度关系的研究[D];浙江大学;2001年
3 刘雁鸣;口腔癌中一氧化氮合酶表达与微血管形成关系的研究[D];浙江大学;2001年
4 孙家强;鼻息肉一氧化氮合酶表达及其意义探讨[D];安徽医科大学;2002年
5 范晓晨;诱导型一氧化氮合酶在病毒性心肌炎发病机制中作用的实验研究[D];安徽医科大学;2001年
6 郑峰;重组人诱导型一氧化氮合酶在V_79细胞中的稳定表达及其对平滑肌细胞增殖的影响[D];第三军医大学;2001年
7 林青;曲马多对福尔马林致痛大鼠脊髓Fos蛋白、一氧化氮合酶、生长抑素的影响[D];福建医科大学;2002年
8 秦杰;单侧输尿管梗阻后大鼠肾脏诱导型一氧化氮合酶的表达及其意义[D];浙江大学;2003年
9 严春花;一氧化氮合酶抑制剂对小鼠肺癌血管形成的影响[D];延边大学;2003年
10 李隆钢;诱导型一氧化氮合酶,硝基酷氨酸在胃癌组织中表达与细胞凋亡的关系[D];中国医科大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 上海交通大学医学院附属仁济医院教授 江基尧 北京天坛医院神经外科教授 张玉琪 整理 匡远深;颅脑创伤治疗少用无效药[N];健康报;2008年
2 记者 孙刚;上海市颅脑创伤研究所成立[N];解放日报;2011年
3 记者 赵雪 通讯员 刘苹 邹争春;我科学家破解腺苷在颅脑创伤中双重作用之谜[N];科技日报;2010年
4 刘苹 邹争春;大坪医院破解腺苷在颅脑创伤中双重作用之谜[N];中国医药报;2010年
5 记者 匡远深;中国颅脑创伤外科手术指南发布[N];健康报;2009年
6 记者 匡远深;颅脑创伤脑保护药物治疗指南发布[N];健康报;2008年
7 严志明 仇逸;上海重度颅脑创伤治疗研究获奖[N];中国医药报;2001年
8 朱国旺;颅脑创伤治疗的学术之争[N];中国医药报;2002年
9 记者 张小军;时松海:在美获得科学重奖[N];新华每日电讯;2001年
10 匡远深;白蛋白等药物不推荐使用[N];大众卫生报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978