透明质酸外敷膜对手术切口的影响

【摘要】： 目的：研制透明质酸外敷膜，通过动物实验观察其对外科手术切口愈合的影响，探讨透明质酸外敷膜抑制瘢痕的作用机制，为临床应用提供实验依据。 方法：1.透明质酸外敷膜的制备：透明质酸、羧甲基纤维素钠配制前以分析天平称量。在超净台内,先用无菌生理盐水配制羧甲基纤维素钠溶液，待完全溶解后，再放入透明质酸，用玻璃棒搅拌配制成均匀的透明质酸凝胶，然后将凝胶平铺于玻璃板上，置低温干燥箱干燥后，在超净台内切割成长5.5 cm、宽1.0 cm的透明质酸外敷膜。2.48只SD雄性大鼠，随机分为8组，实验采用自身对照设计，左侧为治疗组，右侧为对照组。大鼠在全麻下于背部脊柱两侧旁1㎝处，平行脊柱分别做长约5 cm的切口，切开皮肤、皮下组织，深达肌层，3~0丝线缝合。治疗组伤口表面贴敷透明质酸膜后，无菌纱布包扎；对照组伤口表面贴敷生理盐水纱条，无菌纱布包扎。每日换药一次，治疗组用药至术后第14天停止用药。分别于术后1、3、5、7、9、14、21、28天处死一组动物，留取标本，光镜、电镜观察组织形态学变化及透明质酸含量测定。 结果：1.大体观察：术后1、3日；治疗组：伤口较清洁，渗液较少，部分伤口有少许结痂，炎症反应轻，创周无明显红肿。对照组：部分伤口有结痂，部分伤口渗液较多，不易清洁；创周红肿。术后5、7日，对照组炎症 WP=4 减轻，但缝线反应较重；治疗组仅有轻微缝线反应。术后9、14、21、28日，对照组伤口愈合后可见明显的愈合线，而治疗组愈合线不明显。2. HE染色观察：术后1日，对照组，表面见血凝块及炎性渗出物，表皮不连续，真皮切口两侧见较多炎细胞浸润；治疗组，表面见透明质酸和炎性渗出物组成的嗜伊红物，真皮切口两侧炎细胞浸润较少。术后3日，对照组棘细胞层增生明显、肥大，排列较紊乱，炎细胞浸润明显；治疗组棘细胞层增生不及对照组明显，层次清楚。术后5日，两组表皮均已愈合，对照组角化层形成，真皮浅层已愈合，深层近皮下组织处裂隙较宽；治疗组角化程度较轻，真皮愈合较慢，浅层至深层裂隙较一致，炎细胞浸润较明显。术后7日，两组皮肤全层已愈合，对照组角化程度较重，真皮深层炎细胞呈灶状聚集；治疗组基底层细胞排列较整齐，真皮深层炎细胞浸润较对照组为轻。术后9日，对照组成纤维细胞胞体较大，胞核椭圆形，成层壮聚集排列；治疗组成纤维细胞胞体较小，胞核细长，疏松排列。术后14、21、28日对照组角化较重，胶原排列成束、致密，与切口线垂直；治疗组角化较轻，表皮层厚度基本正常、平坦，胶原束较小，排列相对疏松。3.masson染色观察：术后5、7天，治疗组切口两侧可见新生胶原纤维量较少，胶原束较小，排列相对疏松；对照组切口两侧可见量较多的新生胶原纤维，胶原束较粗大，胶原束与切口垂直排列，相对较致密。4.透射电镜：术后3日时，对照组为功能活跃的成纤维细胞；治疗组成纤维细胞功能活跃，但可见轻度褪形性变。术后7日，对照组成纤维细胞周围可见大量胶原纤维分布；治疗 WP=5 组成纤维细胞发生褪形性变，胞核圆形或卵圆形，核染色质丰富、边集呈高电子密度团块，胞浆内可见大小不等圆形高电子密度斑块，细胞周围胶原纤维较少，可见中等电子密度均匀基质样物质。术后14天，对照组表皮细胞胞体小，细胞连接紧密，细胞间桥多见、排列混乱；治疗组可见正常成纤维细胞及有褪形性变的成纤维细胞，周围有大量胶原纤维，从横断面见，纤维较细小、排列疏松；表皮细胞胞体较大，细胞间桥较少、连接较疏松。5.成纤维细胞计数：术后1、3、5天时，治疗组成纤维细胞数量较对照组多(P0.05)；术后7、9、14天时治疗组和对照组成纤维细胞计数无明显差异(P0.05)。炎细胞计数：术后1、3、5日时，对照组伤口浸润的炎细胞数目较治疗组多 (P0.05)，浸润的炎细胞在术后1日时以中性粒细胞为主，术后3、5日时以淋巴细胞为主。术后7、9、14天时，对照组慢性炎细胞较治疗组多(P0.05)。6.HA含量分析：两组间同一时间点比较，术后1天，两组伤口局部透明质酸含量均较高，无明显差异(P0.05)；术后3、5天时，治疗组局部透明质酸含量高于对照组(P0.05), 术后7、9、14天治疗组和对照组伤口局部透明质酸含量，无明显差异（P0.05）。各组内不同时间点比较，治疗组术后1、3天局部透明质酸含量较高，无明显差异(P0.05)，但明显高于术后5、7、9、14天时伤口局部透明质酸含量(P0.05)；而对照组术后1天伤口局部透明质酸含量明显高于术后3天时局部透明质酸含量(P0.05)，术后5、7、9、14天的透明质酸含量与术后3天时无明显差异(P0.05)。 结论：1.初步研究制备了高分子量的HA外敷膜。2. WP=6 高分子量HA外敷膜使HA渗透进入皮肤，抑制瘢痕形成。3.HA外敷膜在创伤愈合早期有较强的透皮作用；随着表皮层愈合，HA透皮作用减弱。4.HA外敷膜对外科手术切口具有一定的抑制炎症反应的作用。5.HA外敷膜在伤口愈合过程中，通过对成纤维细胞的作用，从而影响胶原的合成和沉积。6.HA外敷膜可促使表皮层愈合并延缓角化层形成。