关木通及其复方配伍对肾毒性的影响和作用机制

【摘要】： “中草药肾病”（Chinese Herb Nephropathy，CHN）作为一个不确切的概念，由欧美医学界提出，成为一些国家拒绝部分中药入岸的理由，主要是因为一些药物可能导致肾脏损害，这些药物是指有含马兜铃酸（aristolochic acid，简称AA）成分的广防己、关木通、青木香、龙胆泻肝丸、排石口服液等十几种中药和中成药。 近年国内对含有关木通的龙胆泻肝丸引起的肾损害进行了相关报道，引起各方面的重视，深入研究马兜铃酸类药物引起肾损害的机制及对策，有助于临床上的安全用药。1993年Vanherweghen等报道比利时105名女患者因服用含有中药的减肥药（组成：芬氟拉明﹑安菲拉酮﹑波希鼠李皮﹑颠茄浸膏﹑乙唑胺﹑防己﹑厚朴officinal magnolia bark）1～3年后，有70位病人出现肾功能衰竭，需要进行肾移植或血透治疗。减肥药为中﹑西药混同药物﹐化学药与植物药共用，且芬氟拉明、安菲拉酮也有引起肾脏损害的作用，对此国外某些学者认为造成肾功能衰竭的主要原因是中药所致，并把该事件称谓“中草药肾病”。1999年7月﹐英国两例女性患者服用含有关木通的中药治疗湿疹2～4年后，发生肾功能衰竭，进行血液透析或肾移植治疗。相继美国、英国、日本、西班牙、奥地利、埃及、菲律宾等国家以上述为由宣布禁止销售和使用这类中药。针对国外医生的用药情况，国内进行了有关方面的研究，但归纳起来不外乎是关木通（急毒15～60g·kg-1·d-1和慢毒1g·kg-1·d-1）及其成分马兜铃酸的研究。结果表明，中药关木通或马兜铃酸的肾毒性与剂量和用药时间呈正相关。 中医临床用药，是在辨证基础上，根据中药药性，按组方原则，以复方形式用于临床，而不是单味药或单一成分的应用。谴药组方总的原则是提高疗效，减少毒副作用，并在规定的剂量下确定药物的剂量。这与国外报道的造成肾毒性用药方法是不同的。当然这也并不等于中药复方是无毒副作用的。按照中药药性理论至少可以说有毒药物 WP=6 在复方中应用要比单味药使用毒性低。为了确定中药复方是否真正地内含现代科学依据，设立该课题。我们选择2个含有关木通的复方为例进行了实验研究，并与单味药进行了对比。确定相同剂量下，单独使用关木通与复方中的关木通其肾毒性是否有差异，其差异表现在那些方面，并对其相关可能机制进行探讨，以期为中药复方配伍原则的科学性提供实验依据。 1 关木通的肾毒性作用 目的：观察单味关木通对大鼠肾功能、肾组织形态学的影响，并采用免疫组化和末端标记等方法，观察关木通对肾小管上皮细胞的相关因素的影响。 方法：（1）关木通急性肾毒性实验方法 SD大鼠随机分为正常对照（A组）组和关木通（B组）组，其包括关低组（B1）、关中组（B2）、关高组（B3）三个剂量梯度。关木通急性肾毒性实验，根据《中药新药毒理学研究指南》关木通选用6g·kg-1·d-1、12g·kg-1·d-1、24g·kg-1·d-1三个剂量分别连续给药7天后，称重收集24h尿液；处死动物分别留取血清和肾组织，进行肾功能测定和病理学观察，应用免疫组化检测肾组织纤连蛋白（FN）的表达及用原位末段标记检测对肾小管上皮细胞凋亡的影响。 （2）关木通慢性肾毒性实验方法 SD大鼠随机分为正常对照组（A组）和关木通组（B组）。关木通慢性肾毒性实验，根据《中国药典》法定剂量，采用1g·kg-1·d-1剂量给大鼠连续灌胃三个月。在动物实验的第6w、12w、14w分别取8只大鼠，称重后收集24h尿液；后处死动物分别留取血清和肾组织，检测指标和所用检测方法同关木通急毒部分。 结果：（1）关木通急毒实验结果 ①关木通各剂量组大鼠尿Glu、Upro、β2—MG及血BUN、Scr明显高于正常对照组，且随剂量增加而显著升高（P0.05或P0.01）；其肌酐清楚率（Ccr）明显低于正常对照组，且随剂量增加而减低显著（P0.05或P0.01）。②关木通各剂 量组大鼠NAG、γ—GT酶活性明显高于正常对照组，且随剂量增加而显著升高（P0.05或P0.01）。③HE、PAS染色显示，关木通各剂量组大鼠肾组织均有不同程度的损伤，随剂量的增加损伤加重，病变 WP=7 主要为于皮质区。关低组大鼠皮质区部分肾小管上皮细胞变性较重（为颗粒性变性），肾小管结构不整齐，局部有散在炎细胞浸润。关中组大鼠皮质区?