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表皮生长因子及雌雄激素对小鼠前列腺生长影响机制的研究

贾彬  
【摘要】:良性前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia, BPH)是中老年男性的常见病,严重影响患者的身心健康和生活质量,我国正步入老龄化社会,其发病率逐年升高。该病的发病原因及机制尚不完全清楚,本研究从前列腺细胞雌、雄激素受体的表达、细胞增殖与凋亡及其相关基因蛋白、局部生长因子等几个方面,将表皮生长因子(epidermal growth factor ,EGF)和雌雄激素对小鼠前列腺生长影响及其机制作了深入研究,籍此探讨BPH发生的病因学。研究结果如下: 1. EGF对小鼠前列腺生长的作用及其机制 由河北医科大学实验动物中心饲养的雄性昆明种小鼠60只(合格证号:医动字第04056号)鼠龄为出生后22-27天,平均24.7天,体重15-20克,平均16.8克。随机分为3组,每组20只。分别为A组、B组和对照组。A组小鼠:皮下注射蒸馏水稀释后的EGF,2μg/只/天,连续注射至第28天断颈处死,剖腹取前列腺,称重后70%乙醇固定,4℃冰箱冷藏备用;B组小鼠:皮下注射蒸馏水稀释后的EGF ,1μg/只/天,连续注射至第28天,断颈处死,剖腹取前列腺,称重后70%乙醇固定,4℃冰箱冷藏备用;对照组:皮下注射蒸馏水,连续至28天,断颈处死,剖腹取前列腺,称重后70%乙醇固定,4℃冰箱冷藏备用。 对上述各组动物,均取前列腺进行下述指标的观察:前列腺湿重,病理变化,雌激素受体(estrogen receptor, ER)、雄激素受体(androgen receptor , AR)、bcl-2、bax、c-myc 、表皮生长因子受体(EGF-receptor, EGF-R)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)表达以及细胞凋亡率和增殖率的变化。分别以精密天平称重,光镜观察前列腺病理变化,其余指标用流式细胞法(flow cytometry,FCM)进行定量分析。各定量分析指标中,凋亡率和增殖率用百分率(%)表示,ER、AR、bcl-2、bax、c-myc 、EGF-R、bFGF的表达以标记率(labeled rate)和表达量(expression WP=5 level)表示,其中标记率以百分率(%)表示,表达量则以荧光道数(线性采集)表示其相对含量。所有数据均采用均数±标准差进行统计学处理。 1.1 前列腺湿重的改变 A组59.400±8.750mg,B组38.200±4.320mg, 对照组22.100±4.960mg,三组间存在显著差异(P<0.01)。 1.2 前列腺病理变化 实验组:大小剂量间无明显差别,腺体增生明显,少数腺体扩张成囊,形状不规则,内有分泌物潴留,细胞立方状;多数腺体的腺上皮增生明显,乳头状突起多而细长,细胞呈高柱状。对照组:正常前列腺有大小不等的腺体组成,腺腔呈圆或椭圆形,大小差别大,腺上皮呈单层柱状,腔内有较多染色分泌物。 1.3 前列腺细胞雌、雄激素受体表达  ER的表达 (1)标记率:A组34.850±8.800,B组25.525±6.782,对照组17.638±5.877,实验组与对照组之间存在显著差异(P<0.01),两实验组之间无显著差异,(P>0.05); (2)表达量:A组5.204±0.160,B组4.713±0.353,对照组4.175±0.101,三组间差异有统计学意义(P<0.01)。 AR的表达 (1)标记率:A组35.012±6.292,B组33.612±10.589,对照组21.712±2.921,实验组较对照组明显升高(P<0.05),两实验组之间无显著差异(P>0.05);(2)表达量:A组6.433±0.488,B组5.990±0.427,对照组5.032±0.229,实验组较对照组明显升高(P<0.01),两实验组之间无显著差异(P>0.05)。 1.4 前列腺细胞增殖、凋亡率的改变及相关基因的表达  增殖率改变 A组35.625±6.968,B组30.375±3.777,对照组26.309±2.020,A组与对照组差异明显(P<0.05),A组与B组及B组与对照组之间无统计学意义(P>0.05)。 凋亡率改变 A组9.600±0.515,B组15.075±1.852,对照组21.950±1.584,三组间存在显著差异(P<0.01)。 bcl-2的表达 (1)标记率:A组27.333±6.335,B组25.625±6.629,对照组13.520±1.715,实验组较对照组明显升高(P<0.01),两实验组之间无显著差异(P>0.05);(2)表达量:A组5.609±0.257,B组5.092±0.399,对照组4.226±0.333,三组之间存在显著差异(P<0.05)。 bax的表达(1)标记率:A组31.875±9.144,B组25.600±6.507,对照组19.260±4.761,A组较对照组有显著差异(P<0.05),A组与B组及 WP=6 B组与对照组之间无明显差异(P>0.05);(2)表达量:A组5.746±0.305,B组5.733±0.222,对照组3.875±0.514,实验组较对照组明显升高(P<0.01),两实验组之间没有显著差异(P>0.05)。 c-myc的表达 (1)标记率:A组30.363±9.148,B组26.417±4.547,对照组16.620±3.844,A组与对照组之间有显著差异(P<0.05);A组与B组及B组与对照组之间无明显差异(P>0.05); (2)表达量:A组5.723±0.899,B组5.331±0.252,对照组4.289±0.180,A组较对照组有显著差异(P<0.05);A组与B组及B组与对照组之间无显著差异(P>0.05)。 1.5 前列腺细胞EGF、EGF-R、bFGF的表达 EGF的表达 (1)标记率:A组30.200±5.528,B组24.863±11.357,对照组14.638±1.977,两实验组较对照组明显升高(P<0.05);两实验组之间无明显差异(P>0.05);(2)表达量:A组5.188±0.245,B组4.837±0.329,对照组3.628±0.346,两实验组较对照组明显升高(P<0.01);两实验组之间无显


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