收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

口蹄疫多表位DNA疫苗的免疫原性

黄力  
【摘要】:口蹄疫是一种烈性传染病,通过空气传播,有广泛的动物宿主,并对人也有感染性,是受到广泛关注的人畜共患病之一。根据国际兽疫局(OIE)1996年文件规定,一旦口蹄疫暴发,所有感染和相接触的动物都必需屠杀。大量动物死亡以及因口蹄疫而引起其他无疫情国家的贸易壁垒将会给经济带来沉重的打击。因此,预防是解决问题的唯一办法。尽管传统的灭活苗已经在很多国家有效地控制了口蹄疫的发生,但是疫苗中灭活不完全的病毒又导致了疾病的暴发。科学家们曾试图用含有病毒表位的合成肽或细菌表达的蛋白制备亚单位疫苗。这些疫苗比灭活苗安全,可以诱导实验动物产生抗体有效地中和病毒,但不能有效地保护家畜抵抗病毒的攻击。然而,DNA疫苗提供了一种选择,因为它的免疫原性和安全性,特别是它不存在任何与活病毒可能相关的危险。 1 候选疫苗的结构分析 口蹄疫是由小RNA病毒科的口蹄疫病毒引起的。病毒颗粒由60个亚单位组成,每个亚单位包含各一分子的 VP1, VP2, VP3 和 VP4,这4个分子组成了病毒壳蛋白P1。据报道,编码P1和病毒蛋白酶3C的非复制型DNA疫苗可以诱导产生抗病毒免疫应答。包含病毒全基因组的复制型DNA疫苗可以在易感细胞中复制,并可以产生更强的免疫应答。然而,在强毒攻击实验中,两种DNA疫苗对免疫 WP=4 猪的保护率只有20%。这可能是由于病毒蛋白酶3C和L抑制了宿主细胞的蛋白合成所致。据报道,这两个蛋白水解酶能水解宿主细胞的翻译起始因子eIF4A或 eIF4G, 其最终结果是导致细胞凋亡。 因此,科学家们将研究焦点集中在表位DNA疫苗上。最近的一篇报道显示编码口蹄疫病毒位点1的DNA疫苗对猪产生了100%的保护。位点1包括VP1上的 141AA—160AA和200AA—213AA 两个B细胞表位,是VP1上的优势位点,可以诱导动物产生免疫保护。除了位点1以外,现在已经在O型口蹄疫病毒粒子上发现了4个包含B细胞表位的位点。但是位点1与其他4个位点组合的DNA疫苗至今没有报道。这4个位点分别是位于VP1的位点3,包含40AA—60AA;位于VP2的位点2,包含70AA—78AA和131AA—134AA;位于VP3的位点4,包含56AA—58AA;以及位点5,只有一个氨基酸,即VP1上的149AA。 我们根据GeneBank中O型口蹄疫病毒序列(accession no. X00871)以及相对应的5个位点的序列和VP1上一个通用T细胞表位的序列设计并合成了多表位基因,命名为SG。采用含甘氨酸和丝氨酸的柔性接头以避免因表位直接连接而产生的相互干扰以及新表位的出现。用 EcoR I 和 Xba I将SG克隆到DNA疫苗载体——pVAX1而获得pVAX-SG重组质粒。将pVAX-SG质粒DNA体外转染PK1 细胞、BHK-21细胞或体内转染肌肉细胞,用抗O型口蹄疫病毒的阳性血清进行免疫组化检测,都能在转染细胞胞浆中发现明显的阳性信号,表明表达的病毒表位被阳性血清识别。而空载体对照转 WP=5 染的细胞中未发现阳性信号。 关键词:口蹄疫病毒;DNA疫苗;多表位疫苗 2 DNA疫苗的免疫原性 为了比较这5个位点的不同组合效果,一共构建了5个质粒载体,并在小鼠体内进行效力实验的比较。42只小鼠(雌性,4-6周龄)随机平均分成7组,每组6只。1组和2组是阴性对照组,只注射PBS和pVAX1空载体。组3到组7分别注射构建的5个质粒载体DNA: pVAX-SG, pVAX-N4, pVAX-N51, pVAX-T51 和pVAX-51。所有的小鼠都注射2次,每次间隔3周,每次注射体积是100微升,量是200微克。血清中抗O型口蹄疫病毒的抗体用ELISA检测。脾脏淋巴细胞增殖用标准MTT法测定。脾细胞分泌的IFN-γ和IL-4用ELISA试剂盒定量分析。脾细胞CTL 活性用CTL检测试剂盒检测。CTL的靶细胞是用FuGENE 6转染试剂将线形化的pcDNA-SG转染P815细胞,然后用G418(0.4 mg/ml-1)筛选得到的病毒表位的稳定表达克隆。这些阳性克隆的表达进一步用ELISA和RT-PCR得到确定。阳性克隆维持在含G418(0.1 mg/ml-1)的培养基中。效应细胞是将分离的脾脏淋巴细胞在体外与全病毒蛋白(10 μg ml-1 )共孵育7天而得到。结果表明只有pVAX-SG, pVAX-N4 和pVAX-T51 能诱导抗体产生,但是所有的重组质粒都能诱导细胞免疫应答,如淋巴细胞增殖和明显的CTL活性,以及诱导不同水平的IFN-γ和IL-4。通过比较发现编码位点5, 1 和 T细胞表位的重组质粒能诱导全面的免疫应答, WP=6 并且包含所有5个位点和T细胞表位的质粒pVAX-SG诱导了最强的免疫应答。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王松,周陶友,范红,刘聪,唐红,周思亮,赵连三;乙型、丙型肝炎DNA疫苗单次联合接种后小鼠的免疫应答[J];中西医结合肝病杂志;2000年02期
2 梁紫岩 ,王宏卫;丙型肝炎DNA疫苗的研究进展[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2002年06期
3 郭继华,樊明文,边专,贾荣,陈智,彭彬,范兵;靶向融合防龋DNA疫苗研究(Ⅱ)—编码人Ig基因的质粒pJIg的构建[J];口腔医学研究;2002年04期
4 孙怡;弓形虫疫苗研究进展[J];临沂医学专科学校学报;2005年05期
5 袁立新;DNA疫苗抗血吸虫感染具有显著免疫效果[J];中华医学信息导报;1997年20期
6 张彤,张光磊;免疫刺激DNA序列生物学功能及其在DNA疫苗中的作用[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1998年04期
7 田庚善,姜英;一种可能用于治疗的新疫苗─—DNA疫苗简介[J];中国医刊;1998年03期
8 方玲,姚玉成,景宏彪,谢庆东,赵书民,王忠华,余宏宇,胡以平;HBV表面抗原DNA疫苗对小鼠脏器影响的实验研究[J];癌变畸变突变;2000年04期
9 魏泉德,叶苓,徐劲,余新炳:;DNA疫苗在小鼠体内的组织分布及安全性研究[J];中国人兽共患病杂志;2001年05期
10 邱庆林;抗原靶向APC的嵌合DNA疫苗的研究进展[J];细胞与分子免疫学杂志;2002年01期
11 韩双艳,郭勇;DNA疫苗的研究进展[J];药物生物技术;2002年04期
12 温斌;DNA疫苗与抗肿瘤免疫[J];国外医学.免疫学分册;2003年01期
13 李平忠 ,郭宏雄;DNA疫苗和细胞凋亡[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2004年05期
14 李子健,金宁一,张立树,江文正;人免疫缺陷病毒Ⅱ型核心蛋白DNA疫苗的实验免疫研究[J];免疫学杂志;2005年01期
15 田庚善;DNA疫苗值得重视[J];中华内科杂志;1998年07期
16 雷小军;对HIV-1 env DNA疫苗免疫应答的遗传学控制[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1998年05期
17 胡洁;DNA疫苗[J];海峡预防医学杂志;2000年01期
18 杜德伟,周永兴,白宪光,冯志华,李光玉,姚志强;小鼠对HBV DNA疫苗的免疫应答及细胞因子的免疫佐剂效应[J];医学研究生学报;2001年02期
19 孙建国,廖荣霞;多价CTL表位DNA疫苗研究进展[J];重庆医学;2003年06期
20 孙辉,黄汉菊;汉坦病毒DNA疫苗的研究进展[J];济宁医学院学报;2003年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 居巍;刘君炎;;结核杆菌HSP65佐剂DNA疫苗的实验研究[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
2 姜秀云;何昭阳;;活体电穿孔法导入DNA:牛结核病免疫接种新技术[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
3 靳彦文;钟辉;马清钧;;恶性疟原虫DNA疫苗的安全性研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
4 田洁;刘君炎;;ConA与结核杆菌HSP65DNA疫苗联合应用的研究[A];湖北省暨武汉市免疫学会第八届学术会议论文集[C];2003年
5 熊金虎;赵民;邱小萍;伍欣星;;人乳头瘤病毒嵌合型DNA疫苗的构建及其免疫效应研究[A];湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第七届第十四次学术年会论文摘要集[C];2003年
6 江云波;方六荣;肖少波;牛传双;张辉;陈焕春;;修饰的ORF5基因增强猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗的免疫反应[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
7 吴长有;;DNA疫苗与免疫记忆[A];2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集[C];2005年
8 崔保安;魏战勇;杨明凡;张素梅;;DNA疫苗免疫佐剂的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
9 杨慧兰;葛梦林;杨太成;刘荣卿;;单纯疱疹病毒gD2 DNA疫苗免疫动物诱导的细胞免疫应答[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
10 张冉;易新元;曾宪芳;;日本血吸虫新基因克隆及DNA疫苗的构建和保护性研究[A];中国动物学会全国第九次寄生虫学学术讨论会论文摘要集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张洪英;口蹄疫多表位DNA疫苗的免疫原性和安全性研究[D];第二军医大学;2003年
2 张静;轮状病毒分子流行病学调查及脂质体DNA疫苗研究[D];重庆医科大学;2002年
3 王涛;嗜肺军团菌mip基因DNA疫苗初步研究[D];四川大学;2004年
4 宋立强;异种同源钙激活Cl~-通道DNA疫苗对小鼠哮喘模型的防治作用[D];第四军医大学;2004年
5 时阳;MAGE-1与IL-18共表达DNA疫苗的构建及体内外功能验证[D];吉林大学;2004年
6 郭瀛军;猪带绦虫囊虫病DNA疫苗的中试及免疫效力研究[D];第二军医大学;2004年
7 张梦寒;汉城病毒M片段和汉滩病毒部分S片段核酸疫苗pEGFP-M-S的构建及基因免疫研究[D];苏州大学;2005年
8 焦解歌;猪Endoglin DNA疫苗诱导抗肿瘤血管生成机理研究[D];中南大学;2005年
9 郭慧琛;O型口蹄疫病毒多基因DNA疫苗的研制[D];中国农业科学院;2004年
10 张含;口服DNA疫苗防治实验性脉络膜血管新生[D];中国医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张恒;鸡贫血病毒DNA疫苗的研究[D];山东师范大学;2003年
2 曾政;布鲁氏菌新型疫苗的构建及其免疫原性研究[D];西北农林科技大学;2004年
3 杨帆;鸡传染性支气管炎病毒分离株IBV_(WHNJ)M基因DNA疫苗研究[D];四川农业大学;2004年
4 杨璇;癌胚抗原DNA疫苗的构建及佐剂对其免疫效应的影响[D];郑州大学;2002年
5 黄力;口蹄疫多表位DNA疫苗的免疫原性[D];河北医科大学;2004年
6 张强哲;H5亚型禽流感病毒HA DNA疫苗的研究[D];西北农林科技大学;2003年
7 蒋英;白细胞介素12对结核病DNA疫苗效应的增强作用[D];重庆医科大学;2003年
8 蒋文明;以减毒沙门氏菌为载体传递猪繁殖与呼吸综合征病毒DNA疫苗的口服免疫应答[D];南京农业大学;2004年
9 贾文影;新孢子虫PO基因的真核表达及DNA疫苗的初步研究[D];延边大学;2010年
10 罗彬;犬瘟热病毒H基因克隆分析及DNA疫苗研究[D];中国农业科学院;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 蒋明 周汉桥;DNA疫苗研究取得突破[N];健康报;2005年
2 林明贵 金关甫;DNA疫苗 战胜结核的希望[N];健康报;2003年
3 ;防治早老性痴呆DNA疫苗问世[N];新华每日电讯;2004年
4 ;DNA疫苗“饿”杀小鼠肿瘤[N];医药经济报;2003年
5 陈勇;西尼罗病毒DNA疫苗开始临床试验[N];健康报;2005年
6 梅子;期待从今天开始[N];医药经济报;2001年
7 刘恕;艾滋病疫苗离我们还有多远[N];科技日报;2005年
8 曲国斌;征服艾滋病不是梦[N];健康报;2001年
9 本报记者 王玲 柯玲;中国艾滋病疫苗与时间赛跑[N];经济日报;2005年
10 何雁;何大一:倾心祖国艾滋病防治[N];人民日报海外版;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978