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SM22αC端功能域的重组表达及功能研究

史建红  
【摘要】: 血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化是动脉粥样硬化、高血压和血管成形术后再狭窄等血管重塑性疾病的共同病理生理过程。其中,VSMC表型转化过程中表型标志基因的表达变化和细胞骨架的重构是当前国内外学者研究的热点问题之一。平滑肌22α(SM22α)是近年发现的一种VSMC分化标志物,其表达具有平滑肌组织特异性和细胞表型特异性,该蛋白的确切功能尚不清楚,推测与细胞骨架聚合有关。为了确定SM22α是否与细胞骨架蛋白肌动蛋白(actin)存在相互作用以及二者之间的结合在VSMC骨架重构和表型转化过程中的病理生理学意义,本研究通过重组表达GST-SM22α融合蛋白,制备兔抗SM22α多克隆抗体,用其观察该蛋白在不同表型VSMC中的细胞定位及其与骨架聚合和细胞收缩之间的关系。 1 SM22αC端功能域在大肠杆菌中的高效表达及抗体制备 构建含SM22αC端功能域(72~201位氨基酸)和GST编码序列的原核表达质粒,诱导E. coli高效表达可溶性GST-SM22α融合蛋白,分离、纯化融合蛋白,制备兔抗SM22α多克隆抗体。结果如下: 1.1 pGEX3X-SM22α的构建与鉴定 构建GST-SM22α融合蛋白表达质粒,重组质粒经PCR扩增和BamH I/EcoR I双酶切鉴定后,命名为pGEX3X- SM22α。


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