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沙立度胺及与顺铂联合对Hela细胞影响的研究

卢玲  
【摘要】: 目的:宫颈癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤。近年来化疗的地位不断提高,而化疗药物中的顺铂是首选,但是大剂量化疗药物所带来的严重的副作用及耐药反应对化疗的疗效构成挑战,减少化疗药物的用量及克服耐药将成为提高进展型宫颈癌5年生存率的关键。因此,寻找增加化疗药物的敏感性的途径就显的极其重要。 本实验采用MTT法测定沙立度胺单独及与顺铂联合对人宫颈癌Hela细胞体外生长的增殖抑制作用,采用流式细胞仪分析对细胞周期、凋亡的影响,旨在进一步探讨沙立度胺及与顺铂联合对人宫颈癌Hela细胞株体外生长及对其凋亡、细胞周期的影响,及采用免疫细胞化学法研究沙立度胺对bcl-2蛋白的影响。为沙立度胺在宫颈癌治疗中的应用以及与其它药物联合应用提供理论支持,为宫颈癌联合化疗开辟一条新思路。 方法:1.研究对象:人宫颈癌Hela细胞株。2. MTT法测定药物对Hela细胞生长的抑制率。分为4个试验组:(1)对照组只加培养液。(2)沙立度胺组加入用培养液稀释的终浓度为400mg/L、200 mg/L、100 mg/L、50 mg/L、25 mg/L、12.5 mg/L、6.25 mg/L沙立度胺溶液。(3)顺铂组加入用培养液稀释的终浓度为5mg/L、2.5mg/L、1mg/L、0.5mg/L的顺铂溶液。(4)联合组加入用培养液稀释的终浓度为、100 mg/L、50 mg/L、25 mg/L、12.5 mg/L、6.25 mg/L沙立度胺溶液和终浓度为2.5mg/L的顺铂溶液。每个浓度设置3个复孔,48小时后测定吸光度值。试验重复3次。3.流式细胞仪测定药物对细胞周期及凋亡的影响。采用100 mg/L、50mg/L、6.25 mg/L沙立度胺,联合组采用1mg/L的顺铂,分组同上,48小时后用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡的影响。试验重复4次。4.免疫细胞化学法测定沙立度胺对抑凋亡基因bcl-2表达蛋白的影响。分为2组:(1)对照组只加入培养液(2)沙立度胺组加入用培养液稀释的终浓度为100 mg/L、50 mg/L、6.25 mg/L的沙立度胺溶液, 48小时后,将盖玻片取出,用PBS液洗15分钟,丙酮固定10分钟,4℃保存。按试剂盒说明进行操作,试验重复3次。 结果:1.MTT法测定药物对Hela细胞生长的抑制率。(1)沙立度胺组各浓度抑制率分别于对照组比较,差异均有显著性(p0.01),表现为剂量依赖关系;试验组之间两两比较,差异有显著性(p0.01)。(2)顺铂组各浓度抑制率于对照组比较,差异有显著性(p0.01),表现为剂量依赖关系;试验组之间两两比较,差异有显著性(p0.01)。(3)联合组各浓度抑制率与对照组比较,p0.01,差异有显著性,表现为剂量依赖关系;试验组之间两两比较,p0.01,差异有显著性;于单纯应用沙立度胺比较,p0.01,差异有显著性;与单纯应用顺铂比较,6.25 mg/L沙立度胺联合顺铂组p0.05,其余细胞抑制率均明显高于单纯应用顺铂组。2.流式细胞仪分析药物对Hela细胞的细胞凋亡及周期的影响。(1)沙立度胺组细胞凋亡率与对照组比较,p0.01,有统计学意义,且差异有显著性,与沙立度胺浓度呈剂量依赖关系。各浓度沙立度胺对G0和PI的影响,与对照组比较,p0.01,有统计学意义,且差异有显著性。(2)顺铂组凋亡率与对照组比较,各浓度顺铂对细胞周期影响,与对照组比较,p0.01,有统计学意义,且差异有显著性,(3)联合组药物对凋亡率、G0/G1和PI的影响与单独应用沙立度胺组及1mg/L顺铂组比较, p0.01,有统计学意义,且差异有显著性。3、免疫细胞化学法对凋亡抑制基因bcl-2蛋白的检测。浓度为6.25、50、100mg/L的沙立度胺作用于Hela细胞,于对照组比较,bcl-2蛋白的含量下降,差异有统计学意义(p0.05、p0.01)。 结论:沙立度胺能显著抑制人宫颈癌Hela细胞株的体外生长,影响细胞周期,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖关系;沙立度胺可以降低抑凋亡基因bcl-2表达蛋白的含量,这可能是促进肿瘤细胞的凋亡的机制之一。沙立度胺与化疗药物顺铂联合应用,协同作用显著,并呈剂量依赖关系。


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