收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

ERK表达及活化在食管癌进展过程中的作用机制研究

赵萌  
【摘要】: 食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一, 1999年WHO资料中显示,中国食管癌患者占世界总数的46.6%, 90%的食管癌为鳞癌,腺癌约占5% ~10%。每年因食管癌而死亡的人数已列居恶性肿瘤的第四位。尽管目前食管癌的癌前病变病理诊断技术己有很大的提高,新的预防措施和更有效的联合治疗方法的改进,仍阻挡不了食管癌发病率的上升。因此,进一步研究临床抗肿瘤药物作用靶点及食管癌变过程中相关信号转导途径的活化,仍为食管癌的治疗研究的目标。 细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases , ERKs)为丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族的一个亚族,广泛存在于各种生物体中,在细胞癌变过程中具有重要作用。其可被多种丝裂原信号和癌基因产物激活成磷酸化状态(P-ERK),转导信号至细胞核内,参与调节细胞增殖、分化、凋亡等多种生理过程,并在细胞的恶性转化中起重要作用。 羟基喜树碱(HCPT)是近年从我国珙桐科植物喜树中提取的抗癌生物碱——喜树碱的衍生物,是我国临床一线的化疗药物,广泛用于胃肠道恶性肿瘤、肝癌、白血病、膀胱癌、肺癌等恶性肿瘤的化疗。但其抗癌作用机制目前尚不十分清楚。近年研究发现,羟基喜树碱能阻止肿瘤细胞从S期进人G2/M期,并可诱发其细胞凋亡。 本课题通过研究ERK表达及其活化(P-ERK)与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床病理特征关系,HCPT对食管癌细胞株Eca109和P-ERK的相关性影响,探讨ERK在食管癌发生发展中的意义,为食管癌的综合性防治研究提供实验依据。 第一部分ERK在食管癌组织中的表达及其意义 目的:研究食管鳞状细胞癌组织及黏膜组织中的细胞外信号调节激酶(ERK)的表达及磷酸化水平,探讨ERK在ESCC发生发展中的作用及其意义。 方法:收集60例新鲜食管癌组织和25例粘膜组织,食管癌组织经临床病理确诊为鳞状细胞癌。采用RT-PCR法及Western blot法分别检测食管癌组织与粘膜组织ERK转录水平和翻译水平的表达情况及ERK活性水平的高低,并与食管癌临床病理特征进行相关性讨论分析。 结果: 1. RT-PCR结果显示:食管癌组织中ERK基因的条带密度和宽度明显高于粘膜组织。可见ERK mRNA基因表达在食管癌组织中明显增高,而在粘膜组织中呈现低表达。食管癌组织ERK mRNA的相对表达量为(0.656±0.070),粘膜组织为( 0.450±0.055 )。差异有统计学意义(P0.01)。 2.由Western blotting结果可以看出,ERK及其活化状态(P-ERK)在食管癌组织中表达明显增强,而在食管粘膜组织中则呈低表达。食管粘膜组织及癌组织中ERK及P-ERK的相对表达量分别为(0.581±0.053 vs 0.702±0.703;0.542±0.053 vs 0.659±0.072)。差异均有统计学意义(P0.01)。 3. ERK的表达与临床病理特征的关系 RT-PCR结果显示:ERK在患者的年龄(≥60与60)、性别(男与女)和分化程度(高中分化与低分化)各组间的表达无显著性差异(P0.05),而在临床分期、淋巴结转移各组间有显著性差异(P0.05),且T3-4期患者ERKmRNA基因的表达强度显著高于T1-2期患者(0.717±0.049 vs 0.643±0.067,P0.01);食管癌淋巴结转移患者ERK mRNA基因的表达强度显著高于无淋巴结转移者(0.705±0.071 vs 0.645±0.066,P0.05)。Western blotting结果显示:T3-4期与T1-2期患者P-ERK及ERK的表达强度(0.700±0.068 vs 0.648±0.069,P0.05;0.743±0.056 vs 0.691±0.070,P0.05);有淋巴结转移患者P-ERK及ERK的表达强度与无淋巴结转移者(0.695±0.054 vs 0.648±0.072,P0.05;0.736±0.072 vs 0.690±0.066,P0.05)。与RT-PCR显示的结果相一致。 小结: 1. ERK及其磷酸化水平在ESCC组织中升高,提示ERK及其活化在ESCC发生中起着不可或缺的作用; 2. ERK的表达及其磷酸化水平与ESCC临床分期、淋巴结有无转移有一定的相关性,表明ERK的表达及其磷酸化在ESCC发展中起着重要作用; 3.尚可认为进一步研究抑制ERK通路的抗肿瘤药物,作为药物治疗ESCC的新靶点。 第二部分食管鳞癌中ERK活化作用机制的研究 目的:通过培养人食管癌Eca109细胞株,观察羟基喜树碱(HCPT)对P-ERK活性和食管癌细胞生长及凋亡的影响,进一步阐明ERK促进食管癌发展的作用机制,为临床治疗提供合理的实验依据。 方法:培养人食管癌Eca109细胞株,加入含有不同浓度的HCPT(5μm/l,10μm/l,20μm/l),采用MTT法检测食管癌细胞株增殖情况,采用流式细胞术分析食管细胞株凋亡情况,采用免疫细胞化学法检测P-ERK蛋白在人食管癌细胞中的定位及表达。 结果: 1. MTT结果显示:HCPT对食管癌Eca109细胞株有明显的抑制生长的作用。不同浓度HCPT处理的Eca109细胞株,OD值均有不同程度减小,差异有统计学意义(P0.01)。且各组细胞增殖程度随HCPT浓度的增高而降低(0.989±0.047;0.860±0.095;0.748±0.036;0.541±0.045),当药物浓度达到20μm/l时抑制细胞增殖达高峰。 2.流式细胞术结果显示:食管癌Eca109细胞经羟基喜树碱处理48小时后细胞生长明显受抑制,且随HCPT浓度的增加,凋亡率逐渐升高(0.80%;3.52%;3.91%;12.72%;P0.01)。结果与前一项实验相一致,说明HCPT促进食管癌细胞株Eca109凋亡,且抑制作用呈明显的剂量依赖性。 3.免疫细胞化学法结果显示:HCPT能显著影响食管癌细胞中P-ERK的表达,阳性细胞随着羟基喜树碱的浓度逐渐增加,其数量逐渐减少,棕黄色颗粒逐渐变小,密度逐渐减低(80.33%;57.67%;52.33%;47.67%;P0.01)。 小结: 1. HCPT抑制食管癌细胞株Eca109细胞增殖,一定浓度范围内,呈现药物剂量依赖性; 2. HCPT促进食管癌细胞株Eca109细胞凋亡; 3. P-ERK在癌细胞中的表达能够被HCPT能够有效的抑制。ERK促进ESCC进展的机制可能与细胞周期的调节相关。 结论: 1. ERK及其活化在食管鳞癌发生发展中起着不可或缺的作用,其可能与食管鳞癌预后有一定相关性,可作为研究预后的重要指标。 2.食管癌细胞增殖与ERK的活化有密切关系,抑制ERK的表达及活化能够抑制食管癌细胞的增殖。 3.羟基喜树碱的抗肿瘤机制可能与ERK下调有关。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李宗海;Ras/Raf/MEK/Erk通路调控细胞功能的机制[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;2000年01期
2 吴献伟;杨华;吴丽;薛荣亮;;细胞外信号调节激酶蛋白在全脑缺血再灌注损伤后的表达及与凋亡的关系[J];内蒙古中医药;2010年15期
3 沈梅红;李忠仁;项晓人;牛文民;张春兵;;电针对MCAO大鼠ERK蛋白表达的影响[J];针灸临床杂志;2007年07期
4 吴献伟;吴丽;薛荣亮;;全脑缺血再灌注后磷酸化ERK蛋白的表达及应用PD98059后对其表达的影响[J];实用医技杂志;2008年02期
5 盛宏申,黄维国,王锦铃,姜鸿彦,邱建华;庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮自发修复的分子机制研究[J];中国临床康复;2002年09期
6 郭松;王建超;王芳;;TGF-β和ERK在骨质疏松大鼠骨组织中的表达[J];中国康复;2007年05期
7 张莹;孙黎光;叶丽平;曹师承;王玉;;铅对大鼠神经胶质培养细胞ERK活力及总量的影响[J];毒理学杂志;2007年05期
8 马俊骥;姜慧卿;李芳芳;崔东来;刘丽;扈彩霞;张杰英;;RKIP在胆总管结扎肝纤维化大鼠肝脏组织的表达[J];中国老年学杂志;2008年20期
9 钟华;何芳;胡清华;王振焕;邓峰美;孙志萍;李增春;;血管平滑肌细胞中ERK通路与TGF-β_1/Smad通路的相互作用[J];中国应用生理学杂志;2010年01期
10 章丽霞;刘钧;;细胞外信号调节激酶(ERK)与宫颈癌关系的研究进展[J];川北医学院学报;2010年05期
11 周舟,王小华,Igisu Hideki,林远,楼淑芬,Matsuoka Masato,程天民,余争平;辐射诱导IEC-6细胞MAPK信号转导途径的激活(英文)[J];辐射研究与辐射工艺学报;2002年02期
12 李军,曹红;MAPK级联反应与缺血性脑损伤[J];国外医学.麻醉学与复苏分册;2002年04期
13 王芳;;PD184352对舌鳞状细胞癌细胞增殖及ERK蛋白表达的影响[J];口腔医学研究;2007年06期
14 庹勤慧,廖端芳,朱炳阳,严奉祥;金粉蕨素拮抗血管内皮细胞氧化应激损伤及机制[J];中国临床药理学与治疗学;2003年04期
15 白晶;刘先胜;徐永健;谢敏;;ERK信号通道调控大鼠气道平滑肌细胞的增殖与凋亡(英文)[J];中国生物化学与分子生物学报;2007年01期
16 王启章;郭毅;韩利民;钟秀琼;肖建青;王玲;黄术良;;ERK信号转导途径在小檗碱抑制脂多糖诱导的COX-2表达中的作用[J];中国实用医药;2010年03期
17 张凌云;刘静;刘云鹏;曲秀娟;侯科佐;;ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移[J];现代肿瘤医学;2010年06期
18 郭睿;齐凤杰;;ERK与bFGF蛋白在乳腺癌中表达及意义[J];辽宁医学院学报;2008年04期
19 赵俊霞;闫永鑫;王彦玲;韩硕;闫蕴力;;刺五加多糖通过ERK信号转导途径诱导H446细胞G_2/M期阻滞[J];基础医学与临床;2010年01期
20 吴向华;陆云飞;黄名威;;ERK及JNK/MAPK通路在复发转移乳腺癌中的表达及临床意义[J];广东医学;2010年14期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 梁正贤;刘娜;刘丽梅;柳思佳;雍彦礼;孙伟正;;补肾生血法对慢性再生障碍性贫血患者骨髓ERK号通路相关蛋白表达的影响[A];全国中西医结合血液学学术会议论文汇编[C];2010年
2 周妙妮;许文;付丽芳;洪为松;关翠萍;许爱娥;;HU16培养基对表皮黑素细胞ERK1/2信号通路的激活[A];2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2010年
3 Michelle C.Mendoza;Sarah J.Mahoney;Didem Ilter;John Blenis;;Down-regulation of CMTM8 induces EMT-like changes and cell motility through c-MET-ERK signaling[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
4 金龙腾;张和;李昌崇;张维溪;林立;;ERK信号通路在白介素-1β介导人胚肺成纤维细胞增殖和活化中的作用及香菇多糖的调控[A];2011年浙江省医学会儿科学分会学术年会暨儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2011年
5 王新华;王士雯;周荣斌;李泱;李宗斌;赵玉生;朱庆磊;刘昱圻;;地黄低聚糖对体外培养的骨髓间充质干细胞增殖和ERK表达的影响[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年
6 王俊英;刘俊岭;陈淑萍;乔丽娜;高永辉;;电针镇痛与海马、下丘脑ERK信号通路的关系的研究[A];第十五届针灸对机体功能的调节机制及针灸临床独特经验研讨会暨第十一届针灸经络学术研讨会会议论文集[C];2010年
7 凌晴舟;孟程博;吴胜男;邢达;;利用FRET技术实时监测弱激光刺激下ERK和FoxM1的相互作用[A];中国光学学会2011年学术大会摘要集[C];2011年
8 冯杰;张英杰;吴胜男;邢达;;低功率激光照射通过激活ERK/Sp1信号通路促进血管再生[A];中国光学学会2011年学术大会摘要集[C];2011年
9 王凌霄;彭代辉;方贻儒;黄建华;;ERK/CREB信号通路磷酸化水平在慢性应激模型大鼠海马中研究[A];中华医学会精神病学分会第九次全国学术会议论文集[C];2011年
10 王桂美;严晓红;陆欢;胡敏;丁雅澜;;硫化氢活化ERK抵抗内质网应激引起的心肌细胞凋亡[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘密;艾灸促进应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜修复作用及其ERK信号转导途径的研究[D];湖南中医药大学;2011年
2 李文毅;Rap1GAP通过ERK和Akt途径抑制内皮细胞增殖、迁移的实验研究[D];华中科技大学;2011年
3 王海涛;PTSD大鼠海马和下丘脑5-HT1A受体活性及前额皮质ERK变化的实验研究[D];中国医科大学;2010年
4 李印;nm23-H1基因转染对人肺癌细胞中Ras-to-MAPK信号传导通路影响的实验研究[D];四川大学;2004年
5 郑旭锐;“肺病及肠”病理变化及相关调控物质和ERK信号通路研究[D];成都中医药大学;2011年
6 王秋旭;口腔鳞状细胞癌细胞外信号调节激酶及PTEN蛋白表达的研究[D];中国医科大学;2005年
7 刘燕;MEK/ERK信号传导通路在缺氧诱导的外层血—视网膜屏障损伤中的作用[D];中南大学;2012年
8 赵黎;HIF-1α/ERK通路在微波辐射致海马神经元线粒体损伤中的作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
9 郑秀丽;基于肺肠微生态和MEK/ERK信号通路探讨肺与大肠病理传变的生物学基础[D];成都中医药大学;2013年
10 林涛;RKIP调控的Raf/MEK/ERK信号通路在微波辐射诱导PC12细胞凋亡中的作用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵萌;ERK表达及活化在食管癌进展过程中的作用机制研究[D];河北医科大学;2010年
2 刘清南;Adipophilin通过ERK1/2-PPARγ途径促进细胞内脂质蓄积[D];南华大学;2010年
3 许清秀;ERK通路与丙泊酚后处理大鼠的脑保护作用[D];福建医科大学;2011年
4 黄翀;ERK通路抑制剂对白蛋白诱导的人近端肾小管上皮细胞细胞外基质合成的影响[D];南昌大学;2010年
5 霍奇;shRNA干扰食管癌Eca109细胞ERK2表达的实验研究[D];新疆医科大学;2010年
6 赵丽娟;ERK在偏头痛动物模型中的激活及与肥大细胞脱颗粒间的关系[D];山西医科大学;2011年
7 谭雪梅;ERK_(1/2)抑制剂联合5-FU治疗恶性黑素瘤的研究[D];暨南大学;2010年
8 汪晶;Ras和ERK1/2蛋白在脑胶质瘤中的表达及意义[D];南京医科大学;2011年
9 耿雪瑞;ERK信号通路及TGF-β1在强脉冲光对成纤维细胞增殖影响中的作用[D];中南大学;2010年
10 张爱芝;ERK活性对哮喘大鼠CyclinD1表达的影响及调控作用[D];山西医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 尼商;品牌要亮 质量要高 服务要佳[N];国际经贸消息;2000年
2 继成 毛毛;杜马在干些什么?[N];医药经济报;2001年
3 机电商会工程农机分会供稿;尼日利亚发电机市场空间广阔[N];中国机电日报;2001年
4 春晓;进军尼日利亚发电机市场[N];国际商报;2001年
5 印生;印刷业,环保不环保?[N];中国包装报;2000年
6 曾娅;3G牌照拍卖:电信业泛起的最大泡沫[N];人民邮电;2002年
7 赵敏;明日之星[N];厂长经理日报;2001年
8 刘志民;俄国药业复兴梦[N];医药经济报;2002年
9 高国起;提升ACE2活性可消退动脉硬化斑块[N];中国医药报;2010年
10 乔蕤琳 陈英云;哈医大医学遗传学研究室喜获黑龙江省自然科学一等奖[N];北方时报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978