收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

依那普利联合姜黄素对实验性肝纤维化小鼠肝脏的保护作用及机制

孙玉  
【摘要】: 目的:肝纤维化(hepatic fibrosis)是肝脏在受到慢性损伤时细胞外基质(extracellular matrix,ECM)分泌与降解失衡,导致ECM在肝内过度沉积的病理过程,肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是各种致炎因子和ECM的主要分泌细胞,其激活、增殖是肝纤维化的关键环节。在生理状态下,ECM的合成和降解处于一种动态平衡,从而维持肝脏的正常结构。然而持续、过度的炎症反应则加重肝损伤,促进肝纤维化发生、发展。其中细胞黏附分子在细胞与细胞或细胞与ECM之间的黏附过程与炎症及纤维化进程密切相关。NF-κB是广泛存在于细胞内的信号转导通路,被各种刺激因素激活及随后发生的基因表达是肝纤维化发生过程中的关键步骤,这些基因包括:细胞间粘附分子(ICAM-1)、血管细胞间粘附分子(VCAM-1)等,因此我们建立了CCl4致小鼠肝纤维化模型,以探讨血管紧张素转换酶抑制剂依那普利和姜黄素单独应用及联合应用对肝细胞损伤和纤维化的保护作用和对NF-κB及其相关粘附分子表达的影响,以阐明它在抑制肝纤维化形成中的作用及分子机制,为开发有效的抗肝纤维化药物及在临床中的开发应用提供理论依据。 方法:选用8周龄健康雄性昆明小鼠50只,随机分为5组:对照组、肝纤维化模型组、姜黄素治疗组、依那普利治疗组、姜黄素联合依那普利治疗组。适应性喂养1周后,除正常对照组外,各组均给予10%的CCl4橄榄油腹腔注射(5ul/g),每周2次,正常对照组给予生理盐水腹腔注射(5ul/g),每周2次,均注射10周。开始造模2周后对照组及模型组小鼠给予生理盐水灌胃,各治疗组小鼠分别给予姜黄素(100ug/g)、依那普利(10mg/kg)、及姜黄素联合依那普利(姜黄素100ug/g,依那普利10mg/kg)灌胃治疗,每周3次,治疗8周后处死。留取血清检测肝功能ALT、AST、和血清肝纤维化指标HA;留取部分肝组织10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,苏木精-伊红(HE)染色及Masson染色观察肝组织病理学改变;免疫组织化学染色法观察肝组织NF-κB P65、IKB、ICAM-1、VCAM-1蛋白表达;提取肝组织总RNA,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达。 结果:1小鼠一般情况:对照组小鼠精神状态良好,活动自如,模型组小鼠精神萎靡,动作迟缓,体重明显下降;各治疗组小鼠的情况好于模型组。各组小鼠体重依次为:模型组(34.43±4.08g)姜黄素治疗组( 43.38±4.75g ) 依那普利治疗组( 43.56±2.88g ) 联合治疗组(49.75±3.62g)对照组(53.60±3.51g),与模型组比较,各治疗组及对照组小鼠体重均有所增加且有显著差异(P0.05);对照组及联合治疗组小鼠体重高于姜黄素治疗组和依那普利治疗组(P0.05),结果有统计学差异;姜黄素治疗组与依那普利治疗组间及对照组与联合治疗组间小鼠体重比较无显著差异(P 0.05)。 2血清学指标:模型组小鼠血清ALT、AST、HA明显升高,姜黄素治疗组、依那普利治疗组及联合治疗组ALT、AST、HA均有所升高,但均低于模型组,各组小鼠血清ALT水平依次为:模型组(155.29±21.56U/L)依那普利治疗组(92.11±16.89U/L)姜黄素治疗组(83.75±14.54U/L)联合治疗组(47.50±9.17U/L)对照组(26.60±5.22U/L),对照组及各治疗组血清ALT水平均低于模型组(P0.05),结果有统计学差异;联合治疗组效果优于依那普利及姜黄素单药治疗组(P0.05),结果有统计学差异;依那普利治疗组与姜黄素治疗组间血清ALT水平无显著差异(P0.05)。血清AST变化情况:各组小鼠血清AST水平依次为:模型组(205.29±15.86U/L)依那普利治疗组(123.22±10.47U/L)姜黄素治疗组( 98.38±12.41U/L ) 联合治疗组( 79.88±9.83U/L ) 对照组(65.20±16.41U/L),各组之间比较均有统计学意义(P值均0.05);血清HA变化情况:各组小鼠血清HA水平依次为:模型组(1680.22±94.19ng/ml)依那普利治疗组( 869.89±110.53ng/ml ) 姜黄素治疗组(608.71±120.74ng/ml)联合治疗组(396.13±78.17ng/ml)对照组(144.20±37.09ng/ml),各组之间比较均有统计学意义(P值均0.05)。 3肝组织病理学检测 3.1肉眼观察:对照组小鼠肝脏呈红褐色,被膜光滑,质地柔软;模型组小鼠肝脏呈暗红色,颜色晦暗,表面颗粒感,质地较硬;各治疗组小鼠肝组织大体观察明显好于肝纤维化模型组。 3.2光镜下观察 3.2.1 HE染色:对照组小鼠肝脏肝小叶结构正常,肝板走行整齐,无炎细胞浸润及纤维组织增生;模型组肝组织小叶结构被破坏,可见肝细胞变性坏死,大量炎细胞浸润;各治疗组小鼠肝损伤较模型组减轻,模型组与联合治疗组及对照组差异有统计学意义(P0.05),依那普利治疗组与对照组间差异有统计学意义(P0.05)。 3.2.2 Masson胶原染色:对照组小鼠肝组织内仅在血管壁、汇管区有少量胶原纤维存在,无纤维组织增生及假小叶形成;模型组在汇管区可见大量胶原纤维组织增生,并可见假小叶形成;各治疗组纤维化程度均较模型组轻,模型组与联合治疗组及对照组差异有统计学意义(P0.05),依那普利治疗组与对照组间差异有统计学意义(P0.05)。 4免疫组化染色 4.1肝组织NF-κB P65蛋白表达:对照组小鼠肝组织中较少表达NF-κB p65,模型组小鼠肝细胞核中NF-κB p65表达明显增强,胞浆内亦有表达,各治疗组NF-κB p65表达较对照组有所增加,但均少于模型组,各组水平依次为:模型组(2.20±0.10)依那普利治疗组(1.18±0.13)姜黄素治疗组(0.95±0.07)联合治疗组(0.62±0.06)对照组(0.42±0.06),各组间差异均有统计学意义(P0.05)。 4.2肝组织IκB蛋白表达:对照组小鼠肝细胞浆内有较弱的IκB表达,细胞核内无表达;在模型组及各治疗组中表达均较对照组增加,其中联合治疗组阳性表达明显增加,以胞浆表达增多为主,模型组胞浆及胞核中均有表达,以胞核为主,但表达水平低于各治疗组,各组水平依次为联合治疗组(2.20±0.14)姜黄素治疗组(1.35±0.12)依那普利治疗组(1.08±0.07)模型组(0.94±0.13)对照组(0.50±0.06)各组间差异均有统计学意义(P0.05)。 4.3肝组织ICAM-1蛋白表达:对照组肝组织仅肝窦内皮细胞有少量表达,模型组除上述表达增强外,肝细胞浆可见ICAM-1表达,阳性细胞多分布于汇管区、中央静脉周围,肝小叶内炎症细胞浸润区和坏死灶,各治疗组肝细胞ICAM-1阳性表达均较模型组减轻,各组水平依次为:模型组(2.02±0.09)依那普利治疗组(1.61±0.08)姜黄素治疗组(1.11±0.14)联合治疗组(0.75±0.13)对照组(0.36±0.1),各组间差异均有统计学意义(P0.05)。 4.4肝组织VCAM-1蛋白表达:对照组肝组织内几乎无VCAM-1表达,随着炎症及纤维化的发展,肝窦内皮细胞及肝细胞浆中可见阳性表达。模型组在中央静脉、汇管区及炎症灶周围窦内皮细胞阳性表达增加,肝细胞浆内弥漫性阳性表达,各组水平依次为:模型组(1.66±0.11)依那普利治疗组(1.12±0.10)姜黄素治疗组(1.01±0.05)联合治疗组(0.69±0.05)对照组(0.26±0.08),各组间差异均有统计学意义(P0.05)。 5 RT-PCR检测 5.1肝组织ICAM-1 mRNA表达:与对照组相比,模型组肝组织中ICAM-1 mRNA表达明显增加,各治疗组表达高于对照组少于模型组,各组水平依次为:模型组(1.10±0.16)依那普利治疗组(0.79±0.11)姜黄素治疗组(0.69±0.13)联合治疗组(0.42±0.08)对照组(0.29±0.11),与模型组相比,对照组及各治疗组表达水平均有统计学意义(P0.05);对照组及联合治疗组表达水平低于姜黄素或依那普利单药治疗组(P0.05),有统计学意义;对照组和联合治疗组间、姜黄素治疗组和依那普利治疗组间差异无统计学意义(P 0.05)。 5.2肝组织VCAM-1 mRNA表达:模型组、依那普利治疗组、姜黄素治疗组、联合治疗组、对照组水平依次为:模型组(1.39±0.21)依那普利治疗组(0.89±0.12)姜黄素治疗组(0.81±0.12)联合治疗组(0.54±0.10)对照组(0.28±0.10),对照组及各治疗组表达水平均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05);联合治疗组表达水平低于姜黄素或依那普利单药治疗组(P0.05),差异有统计学意义;姜黄素治疗组与依那普利治疗组间差异无统计学意义(P 0.05)。 6肝组织纤维化程度与肝组织ICAM-1和VCAM-1蛋白的相关性分析:ICAM-1、VCAM-1蛋白表达水平与纤维化分期呈直线相关关系,纤维化程度越重,ICAM-1、VCAM-1蛋白的表达水平越高。 结论: 1小鼠经CCl4腹腔注射10周后可诱导典型的肝纤维化模型,且病理改变符合人类肝纤维化的特点。 2肝纤维化的发生发展与NF-κB活性增加及其下游ICAM-1、VCAM-1的高表达密切相关,IκB的高表达则可以抑制肝纤维化的进展。 3依那普利及姜黄素均可改善肝功能及肝组织纤维化及炎症坏死程度,具有抑制肝纤维化的作用。 4依那普利及姜黄素均可能通过抑制NF-κB活性进而减少其下游基因ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达,减轻肝组织炎症及肝纤维化,而发挥对肝纤维化的治疗作用。 5依那普利联合姜黄素给药对肝细胞的保护作用及对肝纤维化的治疗作用优于任一单药治疗,其机制可能与抑制NF-κB激活,减少ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达有协同抑制作用有关。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 徐速;;MTX在发生肝纤维化的银屑病人中的药代动力学[J];国际皮肤性病学杂志;1987年05期
2 叶红军,高永生,王丽英,肖红,计秀生,潘春芝,冯雪梅;血清Ⅲ型前胶原对肝纤维化的诊断价值[J];临床肝胆病杂志;1993年02期
3 彭安国,陈东风,冷思仁,徐有奇;透明质酸、Ⅲ型前胶原、层粘连蛋白对肝纤维化诊断价值的研究[J];中国实用内科杂志;1996年08期
4 王宝恩;肝纤维化的诊断与严重度评估[J];中华肝脏病杂志;1998年04期
5 王建芳;肝纤维化检测指标与肝组织病理学改变关系的探讨[J];江苏医药;1999年02期
6 曾凡杰,刘璐,朱建衡,黄鹰,王媛,刘文虎;肝纤维化指标检测在病毒性肝炎中的应用[J];铁道医学;1999年03期
7 金丽华,徐克成;中药抗肝纤维化治疗[J];胃肠病学和肝病学杂志;2000年03期
8 孙守才,刘光炜;加味四逆散治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的初步研究[J];陕西中医学院学报;2001年01期
9 久太;病毒性肝炎患者血清IV—C、HA和LN水平与肝纤维化的关系[J];西藏医药杂志;2001年02期
10 袭柱婷,单长民,姜学连,栾希英,李珂珂;三棱、莪术抗大鼠免疫性肝纤维化研究[J];中国中药杂志;2002年12期
11 史丽云,梁国庆;中药复方治疗肝纤维化及腹水的电镜实验研究[J];广西中医学院学报;2002年03期
12 石伟珍,葛孝定;血清肝纤维化指标对肝纤维化诊断价值的评估[J];浙江临床医学;2003年05期
13 左和宁,刘凌云;慢性肝病纤维化的血小板功能变化[J];湖南医学高等专科学校学报;2003年04期
14 石小枫,刘杞,刘林,徐曼;三七总苷抗实验性肝纤维化的研究[J];中药药理与临床;2004年01期
15 吴艾萌,汤红,张晓天,周曙岚,朱孝武,赵敬武;彩色多普勒超声检查对慢性肝炎肝纤维化的判断[J];实用肝脏病杂志;2004年03期
16 黄晓丽,唐望先,但自立;结缔组织生长因子——新发现的致肝纤维化因子[J];中西医结合肝病杂志;2005年02期
17 陆伦根;曾民德;;肝纤维化非创伤性诊断[J];中华肝脏病杂志;2006年03期
18 余姣;徐可树;;TGF-β家族在肝纤维化中的不同作用及对策[J];世界华人消化杂志;2006年28期
19 刘荣火;周宇;;核因子-κB抑制剂与肝纤维化关系[J];肝脏;2007年02期
20 李生财;;论肝纤维化中医病机的演变规律[J];新中医;2008年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈俊红;王继;;不同中医治法逆转大鼠肝纤维化的病理观察[A];中华中医药学会中医、中西医结合治疗常见病研讨会论文集[C];2007年
2 李瑞雯;高爱梅;汪晖;;小檗碱对免疫性肝损伤的治疗作用研究[A];全国第十一届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2009年
3 慕永平;小川智弘;河田则文;;蛋氨酸·胆碱诱导大鼠脂肪性肝纤维化肝细胞凋亡机制研究[A];第二十次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2011年
4 程明亮;李宏;姚玉梅;;丹芍化纤胶囊对猪血清免疫性肝纤维化肝中氧化及抗氧化的影响[A];第十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2004年
5 叶国荣;舒建昌;;肝星状细胞在肝纤维化中的作用[A];广东省肝脏病学会2007年年会论文集[C];2007年
6 程井军;曾佑祥;孙雅祥;柯冬桂;熊建玲;;电针治疗非酒精性脂肪性肝纤维化患者30例[A];2011中国针灸学会年会论文集(摘要)[C];2011年
7 严福华;;MR弥散加权成像和MR巨噬细胞成像在肝纤维化炎症分级中的应用研究[A];中华医学会第16次全国放射学学术大会论文汇编[C];2009年
8 肖定璋;;肝纤维化细胞模型的建立[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年
9 缪锡民;;肝纤维化发生机制及治疗对策[A];2005年浙江省感染病、肝病学术会议论文汇编[C];2005年
10 刘克洲;;肝纤维化治疗若干研究进展[A];浙江省中医药学会肝病专业委员会2006年年会暨慢性乙型肝炎诊治研讨会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李志红;酒精性肝纤维化中医证候特点和慢肝消抗酒精性肝纤维化的分子机制[D];北京中医药大学;2004年
2 段志军;肝纤维化形成中MMP-1、TIMP-1表达及益气软肝方保护作用的实验研究[D];大连医科大学;2003年
3 强晖;肝纤维化相关基因的筛选及其功能初步研究[D];第二军医大学;2003年
4 毕红征;RF胶囊抗肝纤维化作用及机理研究[D];成都中医药大学;2005年
5 朱冰;抗纤Ⅰ号方药抗实验性大鼠肝纤维化作用及其分子机制研究[D];河北医科大学;2003年
6 彭彦辉;中药和硒对慢性肝纤维化的预防和治疗作用及其机理研究[D];河北医科大学;2002年
7 翁红雷;干扰素-γ抗肝纤维化动物实验和临床研究[D];浙江大学;2002年
8 吴晓玲;红景天甙对肝纤维化大鼠TGFβ-Smad信号通路的影响[D];重庆医科大学;2005年
9 段颖华;合俞会配穴法治疗肝纤维化的探讨及实验研究[D];广州中医药大学;2010年
10 扈晓宇;化瘀扶正攻下方抗肝纤维化的实验研究[D];成都中医药大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邢陆;加味越鞠丸治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床研究[D];辽宁中医学院;2002年
2 阎文昭;肝组织与血清转化生长因子β_1表达水平与病毒性肝炎患者肝纤维化的关系[D];河北医科大学;2003年
3 陆亚琴;地龙2号抑制实验性大鼠肝纤维化的基础研究[D];东南大学;2004年
4 冯璇;复方归芪颗粒治疗肝纤维化的实验研究[D];南京中医药大学;2010年
5 李一;趋化因子CXCL9及其受体CXCR3在肝纤维化损伤中的基因表达变化研究[D];上海交通大学;2011年
6 薛苗;CTGF特异性小分子干扰RNA对大鼠肝纤维化逆转的影响[D];兰州大学;2011年
7 李成泰;悦肝胶囊Ⅱ对实验性大鼠肝纤维化防治作用的研究[D];延边大学;2003年
8 廖丹;TGF-β1和smad4mRNA在病毒性肝炎肝纤维化中的表达及意义[D];广西医科大学;2003年
9 马玉梅;计算机辅助数字图像分析系统定量检测TGFβ1和FN与肝纤维化相关性的应用研究[D];中国医科大学;2004年
10 蒋莹;肝纤维化组织中TGFβ_1、MMP_1、TIMP_1的表达及其病理学意义[D];新疆医科大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 马艳红;解放军302医院:建立国内首家肝纤维化无创诊疗中心[N];中国医药报;2009年
2 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所 段瑞娴 刘红艳 程勇卫 高啸 林菊生 唐望先 武汉市第七医院 虞涤霞 华中科技大学同济医学院基础医学院病理学系 吴翠环;外源性核酸对大鼠肝纤维化的影响[N];保健时报;2009年
3 黄丁毅;福瑞股份:肝纤维化专科面对“做大”命题[N];医药经济报;2010年
4 徐琪忠 王根华;长征医院研究揭示肝纤维化发病机制[N];中国医药报;2010年
5 记者 胡德荣;动物实验表明—— 一抗肿瘤药可改善肝纤维化症状[N];健康报;2011年
6 吴杨 杨苏河;减缓肝纤维化进程[N];医药经济报;2001年
7 胡德荣;肝纤维化研究多步推进[N];健康报;2004年
8 ;什么是肝纤维化[N];健康报;2005年
9 健康时报记者 刘桥斌;测肝纤维化免穿刺[N];健康时报;2009年
10 记者 张旭;新型无创肝纤维化检测仪可避免75%的肝活检[N];中国医药报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978