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益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病大鼠胃动力障碍的干预作用及其对胃肠激素及SCF-Kit信号系统的影响

孙玉凤  
【摘要】: 目的:糖尿病胃病(Diabetic Gastropathy,DG)、糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetic mellitus,DM)患者最常见的慢性并发症,临床上二者常常并发。DG是指以胃动力低下为特点的临床症候群,其特征是在没有胃机械性梗阻的情况下出现胃排空延迟,已有糖尿病肾病的DM患者DG发病率更高,严重影响DM患者生存质量和预后,因此,探讨DG的发病机制,寻求防治DG的有效方法具有重要意义。DG的发生是多种因素综合作用的结果,具有复杂的病理机制特点,多年来国内外学者不断探索糖尿病胃病的发病机制及有效的治疗方法,但到目前为止,其确切的发病机制尚未完全明了,尚未找到良好的治疗方法和药物。现代医学治疗DG,主要是在控制高血糖、控制高血压、低蛋白饮食及纠正脂代谢紊乱等DM基本治疗的基础之上,使用促胃肠动力药物,但临床效果缓慢,且长期应用不良反应较多。中医药治疗糖尿病胃病具有多途径、多靶点、低不良反应等特点,近年来临床治疗糖尿病及其DG、DN等慢性并发症取得良好疗效,显示出较大潜力和广阔的应用前景。在前期临床实践中,导师陈志强教授根据中医“久病必虚”、“久病必瘀”病机学理论及“异病同治”的辨证论治理论,结合糖尿病临床表现及糖尿病胃病和糖尿病肾病的病理、病机特点,总结归纳DG的基本病机为“气阴两虚、癥积阻络”,治疗当以益气养阴消癥通络为主,结合多年的临床用药经验,拟定了以益气养阴消癥通络为主的中药复方制剂,其主要药物有黄芪、丹参、鳖甲、地龙等,运用该方在临床上治疗糖尿病胃病及糖尿病肾病,取得了良好疗效,为进一步证实该方的治疗作用,并探讨其可能的作用机制,同时为中医学“异病同治”辨证论治理论提供实验依据,进行了本项研究。借助糖尿病肾病胃动力障碍动物模型,观察对糖尿病肾病大鼠胃动力障碍的治疗作用,同时,观察益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠血清胃泌素、瘦素和血浆胰高血糖素水平,胃组织瘦素及其受体的表达,胃组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平,胃Cajal间质细胞以及SCF-Kit信号系统的影响,探讨其可能作用机制,为临床应用提供可靠的实验依据。 方法: 1益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病大鼠胃排空的治疗作用 健康雄性SD大鼠80只,按体重随机分为对照组(Control)、模型组(Model)、中药低剂量组(low dose treated)、中药中剂量组(Middle dose treated)、中药高剂量组(High dose treated)。适应性饲养一周后,分别测定尿蛋白阴性后行左肾摘除术。2周后除对照组外,其余组大鼠腹腔注射1% STZ40mg/kg,72h后测血糖≥16.7 mmol/L为DM成模标准,约3周时间测定糖尿病大鼠24h尿蛋白定量≥30mg,为糖尿病肾病大鼠模型制备成功。造模成功后,中药低、中、高剂量组大鼠分别给予中药5.29g/(kg.d)、10.58g/(kg.d)、21.16g/(kg.d)灌胃,对照组及模型组给予等体积的生理盐水灌胃,每日一次,共6周。于用药后第6周末,收集24小时尿液,留取血,分离血清,测定血糖、血清尿素氮、肌酐、谷丙转氨酶、胆固醇、甘油三酯;杀检动物,剖腹,结扎贲门和幽门,取出整个鼠胃,酚红灌胃法检测胃排空。 2益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃肠激素的影响 2.1益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠血浆瘦素(Leptin)及胃组织Leptin及其受体(OB-Rb)的影响 2.1.1益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠血Leptin的影响 同上方法复制糖尿病肾病胃动力障碍大鼠模型,于用药第六周末留取血标本,观察益气养阴消癥通络中药对DN胃动力障碍大鼠血Leptin的影响。 2.1.2益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃组织Leptin的影响 同上方法复制糖尿病肾病胃动力障碍大鼠模型,于用药第六周末留取胃组织标本,观察益气养阴消癥通络中药对DN胃动力障碍大鼠胃组织Leptin的影响。 2.1.3益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃组织瘦素受体OB-Rb的影响 同上方法复制糖尿病肾病胃动力障碍大鼠模型,于用药第六周末留取胃组织标本,观察益气养阴消癥通络中药对DN胃动力障碍大鼠胃组织OB-Rb的影响。 2.2益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠血清胃泌素(Gastrin)的影响 同上方法复制糖尿病肾病胃动力障碍大鼠模型,于用药第六周末留取血标本,观察益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠血清Gastrin的影响。 2.3益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠血清胰高血糖素(Glucagon)的影响 同上方法复制糖尿病肾病胃动力障碍大鼠模型,于用药第六周末留取血标本,观察益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠血清Glucagon的影响。 3益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃组织SOD活性、MDA的影响 同上方法复制糖尿病肾病胃动力障碍大鼠模型,于用药第六周末留取胃组织标本,观察益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃组织SOD活性及MDA含量的影响。 4益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃Cajal间质细胞超微结构的影响 同上方法复制糖尿病肾病胃动力障碍大鼠模型,于用药第六周末留取胃组织标本,观察益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃Cajal间质细胞超微结构的影响。 5益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃SCF-Kit信号途径的影响 同上方法复制糖尿病肾病胃动力障碍大鼠模型,于用药第六周末留取胃组织标本,观察益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃组织中c-kit mRNA、SCF mRNA的影响。 结果: 1益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病大鼠胃排空的治疗作用 1.1各组大鼠胃排空率的比较 胃排空率,模型组、益气养阴消癥通络中药中、高剂量组与对照组比较均有明显降低(P0.05),中药低剂量组与对照组比较无显著性差异(P0.05);益气养阴消癥通络中药低、中、高剂量组与模型组比较有明显升高(P0.05);中药各剂量组之间比较无显著性差异(P0.05)。 1.2各组大鼠血清尿素氮(BUN)水平的比较 与对照组相比,模型组大鼠血清BUN水平明显升高(P0.01),中药低、中、高剂量各组大鼠血清BUN水平也有明显升高(P0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量各组大鼠血清BUN水平有明显降低(P0.05);而中药组各组之间大鼠血清BUN水平无显著性差异(P0.05)。 1.3各组大鼠血清肌酐(Cr)水平的比较 与对照组相比,模型组大鼠血清Cr水平明显升高(P0.05),中药低、中、高剂量各组之间及与对照组之间无显著性差异(P0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量各组大鼠血清Cr水平有明显降低(P0.05);而中药组各组之间大鼠血清Cr水平无显著性差异(P0.05)。 1.4各组大鼠血胆固醇(TC)水平的比较 与对照组相比,模型组大鼠血清TC水平明显升高(P0.01),中药低、中、高剂量各组大鼠血清TC水平也有明显升高(P0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量各组大鼠血清TC水平有明显降低(P0.05);而中药低、中、高剂量各组之间大鼠血清TC水平无显著性差异(P0.05)。 1.5各组大鼠血甘油三酯(TG)水平的比较 与对照组相比,模型组大鼠血清TG水平明显升高(P0.01),中药低、中、高剂量各组大鼠血清TG水平也有明显升高(P0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量各组大鼠血清TG水平有明显降低(P0.05);而中药低、中、高剂量各组之间大鼠血清TG水平无显著性差异(P0.05)。 1.6各组大鼠血糖水平的比较 与对照组相比,模型组大鼠血糖水平明显升高(P0.01),中药低、中、高剂量各组大鼠血糖水平也有明显升高(P0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量各组大鼠血糖水平有明显降低(P0.01);中药低剂量组大鼠血糖水平明显低于中药中、高剂量组(P0.05)。 1.7各组大鼠谷丙转氨酶(ALT)水平的比较 与对照组相比,模型组大鼠ALT水平明显升高(P0.01),中药低、中、高剂量各组大鼠ALT水平也有明显升高(P0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量各组大鼠ALT水平有明显降低(P0.05);而中药组各组之间大鼠ALT水平无显著性差异(P0.05)。 2益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃肠激素的影响 2.1益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠血浆Leptin及胃组织Leptin及其受体OB-Rb的影响 2.1.1各组大鼠血清Leptin水平 与对照组相比,模型组大鼠血清Leptin水平明显升高(P0.05),中药中、高剂量组大鼠血清Leptin水平明显高于对照组(P0.05),而中药低剂量与对照组相比无统计学意义(P0.05);与模型组相比,中药低、中、高各剂量组大鼠血清Leptin水平均明显降低(P0.05);中药各剂量组之间两两比较,无显著性差别(P0.05)。 2.1.2各组大鼠胃组织Leptin的表达 与对照组相比,模型组大鼠胃组织Leptin的表达明显降低(P0.01),中药低、中、高剂量各组大鼠胃组织Leptin的表达也有明显降低(P0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量各组大鼠胃组织Leptin的表达有明显升高(P0.05);中药各剂量组之间大鼠胃组织Leptin的表达无显著差异(P0.05)。 2.1.3各组大鼠胃组织OB-Rb的表达 与对照组相比,模型组大鼠胃组织OB-Rb的表达明显升高(P0.01),中药低、中、高剂量各组大鼠胃组织OB-Rb的表达也有明显升高(P0.01);中药低、中、高剂量各组与模型组之间及中药各组之间,大鼠胃组织OB-Rb的表达无显著差异(P0.05)。 2.2益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠血清胃泌素(Gastrin,GAS)的影响 与对照组相比,模型组大鼠血GAS水平明显升高(P0.05),中药低、中、高剂量组大鼠血GAS水平与对照组相比无显著差别(P0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量组大鼠血GAS水平均明显降低(P0.05);中药低、中、高剂量组之间大鼠血GAS水平无显著性差异(P0.05)。 2.3益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠血清胰高血糖素(Glucagon)的影响 与对照组相比,模型组大鼠血Glucagon水平明显升高(P0.05),中药低、中剂量组与对照组之间大鼠血Glucagon水平无显著性差异(P0.05);与模型组相比,中药低、中、高各剂量组大鼠血Glucagon水平均有明显降低(P0.05);而中药各剂量组之间相比,大鼠血Glucagon水平无显著性差异(P0.05)。 3益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃组织SOD活性、MDA水平的影响 3.1各组大鼠胃组织MDA含量 结果显示,与对照组相比,DN胃动力障碍模型组大鼠胃组织MDA含量明显升高(P0.05),中药低、中、高各剂量组大鼠胃组织MDA含量也明显升高(P0.05);与模型组相比,益气养阴消癥通络中药低、中、高剂量组大鼠胃组织MDA含量均明显降低(P0.05);中药各剂量组之间比较,高剂量组胃组织MDA含量明显低于中、低剂量组(P0.05),且呈剂量依赖性。 3.2各组大鼠胃组织SOD活性 结果显示,与对照组相比,DN胃动力障碍模型组大鼠胃组织SOD活性明显降低(P0.05),中药低中高各剂量组大鼠胃组织SOD活性也明显降低(P0.05);与模型组相比,益气养阴消癥通络中药低、中、高剂量组大鼠胃组织SOD活性均明显升高(P0.05);中药各剂量组之间比较,低剂量组高剂量组中剂量组(P0.05),且无剂量依赖性。 4益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃Cajal间质细胞超微结构的影响 4.1光镜观察结果 对照组大鼠胃粘膜完整,腺体排列整齐,血管丰富,间质细胞较多;模型组大鼠胃粘膜不完整,腺体排列紊乱,血管数量减少,间质细胞数量减少;中药组大鼠胃粘膜尚完整,腺体排列较整齐,血管数量较丰富,间质细胞数量较多。 4.2电镜观察结果 对照组大鼠间质细胞胞膜完整,胞浆丰富,线粒体、内质网等细胞器结构正常,胞核完整,核内微细结构正常;模型组大鼠间质细胞胞膜破裂不完整,胞浆减少,仅有少量细胞器残存,细胞核不完整;中药组大鼠间质细胞胞膜尚完整,胞浆略减少,细胞器较少,细胞核完整。 5益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病胃动力障碍大鼠胃SCF-Kit信号途径的影响 5.1各组大鼠胃组织c-kit mRNA表达情况 与对照组相比,模型组大鼠胃组织中c-kit mRNA表达明显减低(P0.05);益气养阴消癥通络中药低、中、高剂量组大鼠胃组织中c-kit mRNA表达明显低于对照组(P0.05);与模型组相比,益气养阴消癥通络中药低、中、高剂量组大鼠血胃组织中c-kit mRNA表达明显增强(P0.05);中药中剂量组明显高于中药低、高剂量组(P0.05)。 5.2各组大鼠胃组织SCF mRNA表达情况 与对照组相比,模型组大鼠胃组织中SCF mRNA表达明显减少(P0.05);益气养阴消癥通络中药各剂量组与对照组比较,大鼠胃组织中SCF mRNA表达明显减低(P0.05);与模型组相比,益气养阴消癥通络中药低、中、高各剂量组大鼠胃组织中SCF mRNA表达明显增强(P0.05);中药中剂量组明显高于中药低、高剂量组(P0.05)。 结论: 1益气养阴消癥通络中药能改善DN胃动力障碍大鼠一般状况,改善肾功能、肝功能,降低血糖、血脂,促进大鼠的胃排空。 2 DN胃排空障碍大鼠存在胃肠激素紊乱,血清Leptin、GAS、Glucagon水平明显升高;益气养阴消癥通络中药可明显降低DN胃排空障碍大鼠的血清Leptin、Glucagon水平,此可能为其改善糖尿病肾病大鼠胃排空的机制之一;而GAS与DN胃动力障碍之间的关系以及与中药改善胃排空作用是否相关尚不明确;益气养阴消癥通络中药改善DN模型大鼠胃排空功能,其作用机制可能与其对DN模型大鼠胃组织Leptin基因及OB-Rb表达的影响无关。 3 DN胃动力障碍大鼠存在抗氧化能力减低和氧化应激增强;益气养阴消癥通络中药可明显提高DN胃动力障碍大鼠抗氧化能力,抑制其氧化应激,可能为其改善DN胃动力障碍大鼠胃排空的机制之一。 4 DN胃动力障碍大鼠胃粘膜及Cajal间质细胞超微结构损伤;益气养阴消癥通络中药可能是通过改善DN胃动力障碍大鼠胃粘膜及Cajal间质细胞超微结构损伤,进而促进DN胃动力障碍大鼠的胃排空。 5 DN胃动力障碍大鼠胃组织中c-kit mRNA及SCF mRNA表达明显减少;益气养阴消癥通络中药可明显上调DN胃动力障碍大鼠胃组织中c-kit mRNA及SCF mRNA表达,进而改善Cajal间质细胞功能,可能为其改善DN胃动力障碍大鼠胃排空的机制之一。 6综合分析,并结合既往研究结果,提示中医学“异病同治”理论具有一定科学性和实用性。


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