收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

化浊解毒法对肝纤维化大鼠TGF-β/Smad信号转导通路的影响

张纨  
【摘要】: 肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)是指肝细胞发生坏死或炎症刺激时,肝脏内纤维结缔组织增生与分解失衡,从而在肝内异常沉积的病理过程,是多种慢性肝病的重要病理特征和发展至肝硬化的必经阶段。2006年美国第三届肝纤维化专题会议明确了肝纤维化是可逆的。Hans Popper教授说:“谁能阻止或延缓肝纤维化,谁将能医治大多数慢性肝病”。 肝纤维化发生的关键是肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的激活及其激活后细胞外基质(extracellular matrixc,ECM)异常表达。从细胞因子及其信号转导角度研究药物的干预机制,有利于促进HF治疗学研究。转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1-1,TGF-β1)是最重要的促肝纤维化细胞因子之一,具有抑制肝细胞增殖、诱导肝细胞凋亡,激活HSC、促进其产生ECM等作用,TGFβ/Smad信号转导通路是TGFβ发挥这些生物效应重要的信号转导通路。 目前临床仍缺乏高效、无明显毒副作用的治疗HF的西药。中医药通过多途径、多环节、多靶点的综合药理学作用在抗HF方面展现出优势,显示了良好的前景。李佃贵教授经过多年的临床实践和基础研究,结合当今疾病模式及疾病谱的变化,提出以“浊毒”立论治疗肝纤维化的理论,并应用化浊解毒调肝法进行治疗,取得较好疗效。依据此理论确立的肝复健方能显著改善HF、慢性肝炎患者临床症状,促进HF指标的恢复;肝复健方能明显改善HF模型大鼠肝功能、抑制肝纤维化大鼠血清HA、LN、Ⅳ-C、PCIII水平,抑制胶原纤维增生等作用。本课题以肝纤维化大鼠模型,以秋水仙碱为对照,观察肝复健方对HF大鼠肝脏TGF-β1及其受体、Smad2/3、Smad4、Smda7的表达情况,探讨其对TGF-β/Smad信号传导通路的影响,旨在对本方抗HF的药效和可能的作用机制作进一步的研究,为其临床应用提供实验依据。本实验分为以下五部分: 第一部分浊毒理论与肝纤维化 目的:以浊毒理论为依据探讨其在肝纤维化治疗中的地位,进而提出新的观点与治疗方法。 方法:温习、回顾了中医理论中浊毒源流,提出浊毒相关为害是肝纤维化的主病机,系统总结了肝纤维化浊毒特性的临床表现、基本治法、用药规律及兼夹证的治疗。 结果:梳理了浊毒之源流,探讨了肝纤维化与浊毒的关系,以及化浊解毒调肝法提出的理论依据,从临床论证了化浊解毒调肝方药治疗肝纤维化的可行性。 结论:浊毒是肝纤维化形成和进展过程中重要的始动因素和关键环节,临床上应用化浊解毒法不仅能改善其症状,还可恢复肝脏生理特性,截断或逆转肝脏病理性改变。 第二部分肝复健方对肝纤维化大鼠肝脏病理组织学的影响 目的:将肝复健方应用于造模成功的HF大鼠,观察肝复健方对HF大鼠一般情况和病理组织学的影响。 方法:健康雄性SD大鼠60只,适应性喂养一周,随机分为正常组(Normal)10只,造模组50只。除正常组外,造模组采用腹腔注射未灭活猪血清法造模,每只大鼠每次注射猪血清0.5 ml,每周2次,共8周。造模成功大鼠分为:模型组,肝复健方小剂量组(以下简称GFJL),肝复健方中剂量组(以下简称GFJM),肝复健方大剂量组(以下简称GFJH),秋水仙碱组,每组均10只。GFJL给予含1.5 g生药/ml水煎剂2ml灌胃;GFJM给予含2.25 g生药/ml水煎剂2ml灌胃;GFJH给予含3.0 g生药/ml水煎剂2ml灌胃;秋水仙碱组给予0.154 g/kg·d灌胃;空白组、模型组均给予等量生理盐水灌胃。各组均灌胃至12周末。造模用药期间观察大鼠一般情况。于12周结束时,断颈处死各组大鼠,留取大鼠肝组织,采用苏木精-伊红染色(HE染色)和Masson染色(胶原纤维特殊染色法)观察肝组织病理形态学改变并进行大鼠肝纤维化病变半定量分析。 结果: 1一般情况观察 肝复健方可明显改善HF大鼠的精神状态、饮食、皮毛色泽,增加其体重。 2肝脏大体形态观察 正常组大鼠肝脏质地柔软,表面光滑。模型组大鼠肝脏质地坚韧,表面粗糙,颜色晦暗,有些可见颗粒状的小结节。秋水仙碱组及肝复健方药物治疗组大鼠肝表面较模型组光滑,质地较柔软。 3肝复健方对肝纤维化大鼠肝组织病理的影响 正常组肝小叶结构完整,肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列,无变性坏死,无纤维组织增生。模型组肝小叶结构严重破坏,肝细胞广泛坏死伴炎性细胞浸润,纤维组织大量增生并形成纤维间隔。与模型组比较,各药物治疗组肝小叶结构破坏明显减轻,肝脏胶原纤维增生亦明显减轻,纤维条索疏松变窄。肝细胞水肿好转,变性情况明显改善,炎细胞浸润减少。其中肝复健方高、中剂量组肝脏结构改善较为明显。 4大鼠肝纤维化病变半定量分析 按肝纤维化病变半定量分析判断标准的计分标准,正常组大鼠纤维化程度为0,模型组大鼠纤维化程度为(15.76±0.33),秋水仙碱组大鼠纤维化程度为(5.46±0.20),GFJL大鼠纤维化程度为(11.54±0.36),GFJM大鼠纤维化程度为(9.6±0.16),GFJH大鼠纤维化程度为(5.2±0.12)。与模型组比较,秋水仙碱组、GFJL、GFJM、GFJH大鼠纤维化程度均明显减轻,差异有统计学意义(P0.05)。 结论:肝复健方能改善HF大鼠一般状况,能显著减轻大鼠肝组织炎症活动度及纤维化程度,体现出较强的保肝、抗HF作用。 第三部分肝复健方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1的影响 目的:探讨肝复健方对HF大鼠TGF-β1的影响。方法:免疫组织化学法和RT-PCR法分别检测HF大鼠肝组织TGF-β1的表达。 结果: 1肝复健方对大鼠肝组织TGF-β1蛋白表达的影响 正常肝组织中TGF-β1蛋白微弱表达,显色极淡。模型组较正常组TGF-β1阳性信号明显增强;不同剂量肝复健方组TGF-β1蛋白的表达较模型组明显减少(p0.05),GFJH作用最为明显;秋水仙碱组TGF-β1蛋白的表达较模型组降低(p0.05)。 2肝复健方对大鼠肝组织TGF-β1mRNA表达的影响 与正常对照组相比,模型组、秋水仙碱组和肝复健方大、中、小剂量组TGF-β1mRNA的表达均明显增强,差异有统计学意义(p0.05)。与模型对照组相比,秋水仙碱组和肝复健方大、中、小剂量组TGF-β1mRNA表达明显减弱,差异有统计学意义(p0.05)。且肝复健方大、中剂量组优于秋水仙碱组(p0.05)。 结论:肝复健方可能通过降低肝组织TGF-β1蛋白及基因的表达而达到抗纤维化的作用。 第四部分肝复健方对肝纤维化大鼠肝组织TβRI、TβRII的影响 目的:探讨肝复健方对HF大鼠TβRI、TβRII表达的影响。方法:免疫组织化学法和RT-PCR法分别检测HF大鼠肝组织TβRI、TβRII的表达。 结果: 1肝复健方对大鼠肝组织TβRI、TβRII蛋白表达的影响 正常对照组肝细胞和间质细胞可见TβRI和TβRII阳性染色,模型组TβRI和TβRII阳性染色显著增强(P0.05),尤以纤维增生组织和炎性细胞周围多见。与正常组相比,模型组和各治疗组表达明显升高(P0.05),而与模型组比较,秋水仙碱组和肝复健方各剂量组大鼠肝组织TβRI和TβRII表达则明显降低(P0.05);各治疗组比较,肝复健方大、中剂量组优于秋水仙碱组(P0.05)。 2肝复健方对大鼠肝组织TβRI、TβRII mRNA表达的影响 与正常对照组相比,模型对照组、秋水仙碱组和肝复健方大、中、小剂量组TβRI和TβRIImRNA的表达均明显增强,差异有统计学意义(p0.05)。与模型对照组相比,秋水仙碱组和肝复健方大、中、小剂量组TβRI和TβRIImRNA表达明显减弱,差异有统计学意义(p0.05)。且肝复健方大、中剂量组优于秋水仙碱组(p0.05)。 结论:肝复健方能够显著抑制HF大鼠肝组织TβRI、TβRII型受体蛋白及基因的表达,从而抑制HF的发生、发展。 第五部分肝复健方对肝纤维化大鼠肝组织Smads表达的影响 目的:探讨肝复健方对Smad2/3,Smad4,Smad7蛋白表达的影响,结合二、三、四部分,观察其对TGF-β/samd信号通路的影响。 方法:Western blot检测HF大鼠肝组织Smad2/3,Smad4,Smad7的表达。 结果: 1肝复健方对大鼠肝组织Smad2/3、Smad4蛋白表达的影响(1)所有实验组大鼠肝组织中Smad2/3、Smad4的表达量均高于正常对照组(P0.05);(2)肝复健方各剂量组及秋水仙碱组与模型组相比Smad2/3、Smad4的表达量有显著性降低(P0.05);(3) GFJL与秋水仙碱组相比Smad2/3、Smad4表达量均无显著性差异(P0.05);肝复健方中、大剂量组分别与秋水仙碱组相比Smad2/3、Smad4的表达量有显著性降低(P0.05);(4)GFJH与GFJM相比Smad2/3、Smad4表达量有下降趋势,但无显著性差异(P0.05)。 2肝复健方对大鼠肝组织Smad7蛋白表达的影响(1)所有实验组大鼠肝组织中Smad7的表达量均低于正常对照组(P0.05)。(2)肝复健方各剂量组及秋水仙碱组与模型组相比Smad7的表达量显著升高(P0.05)。(3)GFJL与秋水仙碱组相比Smad7表达量均无显著性差异(P0.05);肝复健方中、大剂量组分别与秋水仙碱组相比Smad7的表达量显著升高(P0.05)。(4)GFJH与GFJM相比Smad7表达量有上升趋势,但无显著性差异(P0.05)。 结论:肝复健方能够抑制受体活化性蛋白smad2和smad3的表达,下调通用性蛋白Smad4的表达,促进抑制性蛋白Smad7的表达,抑制HF大鼠肝脏中TGF-β/smad信号传导通路的激活,从而抑制肝纤维化的发生和发展。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 葛成;BMP信号调控研究进展[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;2002年03期
2 霍艳英;TGF-β及Smads信号在癌症中的作用[J];国外医学.肿瘤学分册;2002年03期
3 宋仕玲;TGF-β及Smad与肝纤维化[J];国外医学.消化系疾病分册;2003年04期
4 周为军;SMAD与血管疾病[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;2004年01期
5 孙燚;宋建星;汪滋民;陈江萍;陈颖;谭晓洁;白晋;;TGF-βRⅠ、Smad2、Smad3及Smad7在瘢痕疙瘩中的表达[J];中华整形外科杂志;2006年05期
6 张伟,王吉耀 ,王根生;SMADs基因与消化系统肿瘤[J];胃肠病学和肝病学杂志;2002年02期
7 李龙英;肖谦;高原;高爱滨;吴绮楠;;SMAD3,SMAD7在糖尿病大鼠心肌组织的表达[J];中国老年学杂志;2009年02期
8 陈跃磊;丁小燕;;BMP信号通路与结肠癌[J];细胞生物学杂志;2009年05期
9 杨红军;SMAD介导的TGF-β信号转导与大肠癌[J];国外医学.分子生物学分册;2001年04期
10 何文喜,牛忠英,赵守亮,臧晓霞,朱怡玲;建立稳定表达Smad蛋白的MDPC-23细胞模型[J];临床口腔医学杂志;2004年02期
11 查佶;黄宇烽;;前列腺癌中TGF-β/Smad信号的研究进展[J];中华男科学杂志;2009年09期
12 王岩;张晾;潘杰;;转化生长因子β1在脑积水发生中的作用[J];现代生物医学进展;2009年19期
13 孙立胜;蒋青;李建新;蒋旭;邵振兴;史冬泉;;硫酸氨基葡萄糖对ATDC5细胞分化和细胞外基质基因表达的影响[J];江苏医药;2011年08期
14 张文岚,孙文伟,卜丽莎,李广生;Smad蛋白家族与骨形态发生蛋白信号传导[J];中国地方病学杂志;2002年04期
15 蔡俊;张柳;;骨形态发生蛋白信号传导系统与成骨细胞分化[J];华北煤炭医学院学报;2007年03期
16 李昕;激活素与骨形成[J];国外医学.骨科学分册;2002年01期
17 王红,侯铁舟,王强,李志丹,李相如,陶虹;氟化物作用下体外培养人牙胚内釉上皮细胞中Smad4表达的变化[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2003年01期
18 孙校男,王先开,娄国强;Smad蛋白与肝纤维化[J];国外医学.流行病学.传染病学分册;2005年04期
19 秦建军,周清华,覃扬,孙芝琳,赵峰,孙泽芳,王艳萍,易成,朱文;Smad3D和Smad7重组腺病毒载体的快速构建[J];中国肺癌杂志;2003年03期
20 谈博,操红缨;TGF-β的信号转导的调控[J];国外医学.分子生物学分册;2002年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘兵;要晖宇;王晓燕;兰雨;毛宁;杨晓;;造血相关干细胞发育与TGF-β/Smad信号调控[A];中国生理学会张锡钧基金会第十届全国青年优秀生理学学术论文综合摘要[C];2009年
2 万赞燕;邵佳亮;胡国信;;羟基喜树碱对CCL4诱导的SD肝纤维化大鼠TGFβ1/Smad信号通路的影响[A];江西省中西医结合学会传染病专业委员会成立大会暨首届江西省中西医结合传染病学术会议论文汇编[C];2011年
3 杨晓;;TGF-β/Smad信号通路维持心血管系统稳态的生理功能和机制[A];第二届模式生物与人类健康研讨会会议论文集[C];2012年
4 刘佳琦;胡大海;张战凤;官浩;折涛;张军;白晓智;;IFN-γ对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β/Smad信号通路作用的研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
5 熊杰;卫伟;马兵;夏照帆;李勤;余文林;程飚;;TGF-β1/Smad3信号转导通路对皮肤成纤维细胞调控作用的研究[A];第七届中国医师协会美容与整形医师大会论文集[C];2010年
6 熊杰;卫伟;马兵;夏照帆;李勤;余文林;程飚;;TGF-β1/Smad3信号转导通路对创面愈合作用的活体内研究[A];第七届中国医师协会美容与整形医师大会论文集[C];2010年
7 张庚;李玉花;许先荣;潘庆;陈明显;周颖;李国平;周苹;许琳;;大黄素对肺纤维化大鼠TGF-β_1及smad_(3/7)信号通路的影响[A];首届全国中西医结合重症医学学术会议暨中国中西医结合学会重症医学专业委员会成立大会论文汇编[C];2010年
8 赵晰;;TGF-β/Smad信号传导通路在肝肾硬化后肾纤维化中的作用机理及中药干预作用[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年
9 杨晓;;TGF-β/Smad4信号通路维持组织稳态的生理功能和机制[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年
10 王俊;;Regulation of Mice Cerebral Angiogenesis by Smad4 and Pten[A];中国遗传学会模式生物与人类健康研讨会会议论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张纨;化浊解毒法对肝纤维化大鼠TGF-β/Smad信号转导通路的影响[D];河北医科大学;2010年
2 熊振芳;蕲艾提取液对肝纤维化大鼠TGFβ-Smad信号转导通路的影响[D];湖北中医药大学;2010年
3 任敏;芩丹胶囊对血管外膜成纤维细胞TGF-β1/Smad信号转导通路影响的研究[D];山东大学;2011年
4 李军;晶状体上皮细胞TGF-β/Smad信号转导通路的研究[D];天津医科大学;2011年
5 薛箭飞;DEDD与Smad3相互作用负性调控TGF-β介导的生物学活性[D];中国协和医科大学;2009年
6 姜维娜;TGF-β1诱导的大鼠系膜细胞Ⅳ型胶原表达过程中MAPK和Smad2通路之间的串话[D];复旦大学;2010年
7 代继宏;Smad对树突状细胞TGF-β信号传导影响机制的初步研究[D];重庆医科大学;2010年
8 龙庭凤;TGF-β/Smad信号传导通路及相关基因在日光性角化病中表达及意义[D];昆明医学院;2010年
9 贺文芳;Smad2在氧糖剥夺再灌注损伤中的表达及其作用机制研究[D];中南大学;2012年
10 赵伟;TGF-β1/Smad信号转导途径在糖尿病肺细胞外基质改变中的作用及GLP-1对其干预效应的研究[D];天津医科大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李瑶;TGF-β1、TβR及Smad2/3在泡球蚴感染小鼠肝脏中的动态变化[D];新疆医科大学;2010年
2 吴芙蓉;橙皮苷抗大鼠肝纤维化作用及对TGF-β/Smad信号通路的影响[D];安徽医科大学;2011年
3 张彦莹;缬沙坦对肝纤维化大鼠TGFβ_1/Smad3,Smad7表达的影响[D];山西医科大学;2012年
4 孙银春;TGF-β siRNA对肝纤维化大鼠Smad蛋白的影响[D];重庆医科大学;2012年
5 王秀丹;TGF-β_1/Smad信号通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌中的作用[D];遵义医学院;2010年
6 姜丽娟;TGF-β1/Smad信号转导通路在OLETF大鼠肺组织中的表达变化及干预研究[D];天津医科大学;2010年
7 龙素军;异甘草酸镁对大鼠肝星状细胞TGF-β/smad信号表达的影响[D];南华大学;2010年
8 沈需;ADSCs对人胆管瘢痕成纤维细胞TGF-β/smad信号通路的作用及机制[D];昆明医学院;2011年
9 周赛;TGF-β1、Smad3及Smad7在宫腔粘连患者内膜及粘连组织中的表达[D];中南大学;2012年
10 魏绪法;泡球蚴感染中期小鼠纤维化肝组织中TGF-β1/Smad信号通路的表达和意义[D];新疆医科大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 通讯员 俞志新 记者 李水根;骨碎补总黄酮可以促进骨形成[N];健康报;2010年
2 记者 李天舒;先天性心脏病病因被发现[N];健康报;2009年
3 ;探秘烧伤的内源性损伤[N];健康报;2010年
4 程书权;单味中草药抗肝纤维化研究进展[N];中国医药报;2001年
5 胡世云 范武庆;单味中草药干预脏器纤维化研究进展[N];中国医药报;2003年
6 程书权;中草药抗肝纤维化研究进展[N];中国中医药报;2001年
7 傅德明;柴胡与丹参配伍抗大鼠肝纤维化作用的实验研究[N];医药经济报;2001年
8 上海香料研究所 朱立弘;化妆品用添加剂初乳精华素有待被认知[N];中国化工报;2001年
9 李焕荣;中药抗肝纤维化机理的研究进展[N];中国医药报;2002年
10 姚希贤;活血化瘀中药治疗肝纤维化疗效肯定[N];中国医药报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978