兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠TNF-α、TLR_4及NF-κBp65表达的影响

【摘要】： 目的:通过观察兰茵凤扬化浊解毒方对疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠一般情况、疾病活动指数(DAI)评分、血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量、结肠组织中Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)及核转录因子κBp65(Nucl-ear transcription factor-Kappa Bp65, NF-k Bp65)蛋白表达的影响,并与柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine tablets,SPAP)进行比较,以期从实验角度进一步证实该方对UC的疗效及作用机理,探索和研究新的治疗方法和行之有效的药物,旨在为临床提供实验基础,拓宽UC的治疗领域。 方法:将60只8周龄健康雄性wistar大鼠随机分为5组,每组12只,分别为正常组(NG)、模型组(MG)、中药大剂量组(HDG)、中药小剂量组(LDG)和SASP组(SPAP)。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(trini-trobenzenesul- fonic acid,TNBs)/乙醇联合造模法(TNBs/乙醇法)诱导大鼠UC动物模型(MK),于造模成功3d后分别对HDG、LDG及SASP进行灌胃治疗。NG予等量生理盐水灌胃。每天对各组大鼠进行DAI评分。灌胃治疗第14d后处死各组大鼠,每只大鼠取血4ml做TNF-α含量的检测,结肠标本采集后立即固定于10%的福尔马林溶液中24小时以上,梯度酒精脱水,石蜡包埋,常规切片(厚度3um),HE染色,显微镜下观察,部分切片用于TLR4和NF-kBp65免疫组化分析。 结果: 1.各组大鼠一般情况与DAI评分 与NG比较,造模后各组大鼠精神不振,活动减少,拱背,被毛松散,毛色偏黄无光泽,食量下降,拉稀便或粘液血便,其中MG大鼠一般情况最差;实验结束时,各组大鼠一般情况均有不同程度的好转,其中MG大鼠一般状况恢复最差,HDG大鼠一般状况恢复并接近于NG,SPAP和LDG大鼠一般状况介于HDG和MG之间,两组无明显区别。在DAI评分方面,MG(2.56±0.23)、HDG(0.68±0.13)、LDG(1.08±0.11)和SASP(1.09±0.10)与NG比较p0.05,有统计学意义;HDG(0.68±0.13)与LDG(1.08±0.11)和SASP(1.09±0.10)比较p0.05,有统计学意义;LDG(1.08±0.11)与SPAP(1.09±0.10)比较p0.05,无统计学意义。 2.结肠粘膜大体观与组织病理学观察 肉眼观察大鼠结肠粘膜MG最差,HDG组恢复接近NG,SPAP和LDG结肠粘膜状况介于HDG和MG之间,两组无明显区别;在组织病理学方面:与NG比较,造模后各组大鼠结肠粘膜上皮细胞完整度、腺体结构、杯状细胞等方面均有所改变,可见不同程度的充血、水肿、糜烂及溃疡灶形成,以MG大鼠表现最为明显;实验结束时,各治疗组大鼠结肠粘膜均有不同程度的恢复,其中HDG大鼠结肠粘膜接近NG,恢复程度做好。MG仍可见组织水肿和充血、炎性细胞浸润及溃疡存在,恢复较差。SPAP和LDG结肠粘膜恢复介于HDG和MG之间。 3.兰茵凤扬化浊解毒方对UC大鼠血清TNF-α含量的影响 各治疗组血清TNF-α含量与MG(1.10±0.29)比较p0.05,有统计学意义;HDG(0.75±0.10)与SPAP(0.90±0.07)、LDG(0.88±0.09)比较p0.05,有统计学意义;LDG(0.88±0.09)与SPAP(0.90±0.07)比较p0.05,无统计学意义。 4.兰茵凤扬化浊解毒方对UC大鼠NF-kBp65及TLR4表达的影响: 各组NF-kBp65及TLR4表达与MG(194.2±12.4、81.6±8.6)比较p0.05,有统计学意义;HDG(89.0±10.7、7.6±2.4)与SPAP(103.5±9.47、36.4±7.7)、LDG(105.0±10.2、46.0±8.9)比较p0.05,有统计学意义;LDG与SPAP比较p0.05,无统计学意义。 结论: 1.TNBs/乙醇法可以成功诱导UC大鼠模型,在临床表现及病理学表现方面与人UC有很高的相似程度。该模型方法简单,价格适中,重复性好。 2.兰茵凤扬化浊解毒方能较快缓解UC大鼠腹泻、粘液便、脓血便等临床表现,并且能较好的控制组织充血、水肿,促进组织糜烂及溃疡的愈合。且其疗效与中药剂量大小有关。 3.兰茵凤扬化浊解毒方治疗UC的机理可能是通过对TNF-α等促炎因子的调节来调控TLRs/NF-kB通路,抑制NF-kB的活化及释放,起到抗炎和调节免疫作用。