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苏云金芽胞杆菌MB-15菌株特性及其可湿性粉剂的研究

葛东华  
【摘要】:苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis MB-15(Bt MB-15)分离自河北省土壤,生物活性测定结果表明该菌株对蔬菜上的鳞翅目害虫具有广谱的杀虫活性。为了进一步评价该菌株的应用潜力,本研究对该菌株的杀虫谱、杀虫毒力、形态特征、蛋白型和基因型等进行了深入研究。另外,还以Bt MB-15的胞晶混合物冻干粉为原材料,对其可湿性粉剂的配方进行了筛选。现将主要研究结果总结如下。 1.室内生物活性测定结果表明,Bt MB-15对棉铃虫(Helicoverpa armigera)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、小菜蛾(Plutella xylostella)、斜纹夜蛾(Spodoptera litura)和菜青虫(Pieris rapae)等5种鳞翅目害虫的毒力均高于标准菌株Bt HD-1的毒力,并且该菌株的上清液对胞晶混合物的杀虫活性有明显的增效作用。光学显微镜下观察该菌株的伴胞晶体为菱形,SDS-PAGE分析显示其伴胞晶体主要由130.0kDa和65.0kDa两种蛋白组成。PCR-RFLP鉴定结果表明该菌株含有cry1Ac、cry2Aa、cry1I和vip3Aa基因。这些说明Bt MB-15菌株具备开发成毒杀鳞翅目害虫微生物杀虫剂的潜力。 2.以Bt MB-15胞晶混合物冻干粉(简称为Bt菌粉)为原材料,通过对载体、润湿剂、分散剂、稳定剂和紫外光保护剂的筛选,获得了Bt MB-15可湿性粉剂的配方为:原药Bt MB-15菌粉50.0%、润湿剂十二烷基苯磺酸钠10.0%、分散剂木质素磺酸钠5.0%、稳定剂黄原胶1.0%、紫外光保护剂脱脂奶粉1.0%、载体白炭黑33.0%。质量检测结果表明制剂中晶体蛋白含量2.4%,效价为26546IU/mg,悬浮率74%,润湿时间123s,制剂的各项指标均符合GB/T 19567.3-2004苏云金芽胞杆菌可湿性粉剂的要求。盆栽药效实验证明该粉剂与市售的同类产品防治效果及持效期相当。3.以小菜蛾为供试昆虫,采用浸叶法测定了6种添加物对Bt MB-15可湿性粉剂的增效作用,并对具有增效作用的混配组合进行了增效作用的评价。结果发现,0.1%ZnCl2、0.5%ZnCl2、1.0%ZnCl2、1.0%MgCl2、0.5%硼酸、1.0%硼酸、0.5%柠檬酸和1.0%柠檬酸对Bt MB-15可湿性粉剂表现出增效作用,其中0.5%硼酸对Bt MB-15可湿性粉剂的增效作用最强,增效比为17.2,1.0%ZnCl2次之,增效比为15.6。同时,杀虫速度的测定结果显示,0.5%硼酸的加入使Bt MB-15可湿性粉剂的致死中时缩短了约10h,加快了Bt的杀虫速度。此外,当将1.0%ZnCl2和0.5%硼酸分别与Bt MB-15可湿性粉剂溶液室温下混合放置15d后,两种混合物的毒力均没有明显的变化。


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