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番茄灰霉生防菌的筛选、鉴定和生防机制初探

魏东盛  
【摘要】: 本研究采用稀释法从土壤、叶子、根和花4种不同的样本中分离细菌,共分离得到315株。采用平板法和叶盘法相结合的方法对其进行初步筛选和再次筛选,经初步平板筛选后,有95株细菌对番茄灰霉有抑制作用。经过第一次叶盘法筛选后,有44株在叶盘上有抑制作用,其中有12株能较强抑制灰霉菌生长。在第二次叶盘法筛选中得到2株既能在无营养平板上扩展又能在叶盘上抑制灰霉菌生长的菌株。第三次叶盘试验表明,这两个菌株能在叶盘上完全、持久的抑制灰霉菌的生长。在叶盘上抑制作用较为明显的6个菌株中有3株来自于植物的地上部分,抑制作用最强的菌株B21和B14来自于重病田的健康番茄植株。 对B21的鉴定结果表明,无论是它的形态特征还是生理生化特征均与枯草芽孢杆菌的特征相符合,因此初步确定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。 用平板对峙生长法对B21的菌体抑菌谱进行测定,结果表明,B21是一株有较广抑菌谱的生防菌株,除能抑制灰霉菌之外,还能抑制棉花黄萎菌等多种病原菌. 用摇瓶发酵的方法对B21的发酵条件进行了初步筛选。结果表明,在所选的培养基为PS,发酵温度为30℃、转速为200rpm、初始pH值为6。发酵时间为36h时产生的抑菌物质的抑菌活性最强。 温室防治试验结果表明,在提前24h接种灰霉菌的孢子悬浮液的情况下,菌株B21无菌发酵液能显著抑制灰霉病的发生,防治效果比常用的农药万霉灵500倍稀释液效果还要好,因此,它有可能成为一种有效的生防制剂。 用平板法、叶盘法结合组织透明法对B21的生防机制进行了初步研究。用洋葱内表皮所做的组织透明实验结果表明,在洋葱内表皮上灰霉菌的孢子萌发和菌丝生长均受到抑制,并且灰霉菌的分生孢子形状发生畸变。叶盘法实验结果表明,无菌发酵液在叶盘上同样也能抑制灰霉菌孢子萌发和菌丝生长。因此可以确定,枯草芽孢杆菌B21能分泌某种抑菌物质。平板对峙试验表明,这种抑菌物质能使真菌的菌丝变粗,细胞壁产生空洞,造成细胞的内容物流出,菌丝断裂。 河北农业大学硕十学广沦文 用菌丝生长法对无菌发酵液有效制物质的性质进行初步研究结果表明,饱扣度 为80%的硫酸铰能沉淀下大部分的抑菌活性,因此这种抑菌物质很可能为多肽类的 物质.


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