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新城疫病毒野毒株的分离鉴定及其融合蛋白部分序列同源性分析

梅双双  
【摘要】: 本实验采用SPF鸡胚及鸡胚原代成纤维细胞,从河北省某鸡场新城疫免疫抗体很高的病死鸡的脑组织中分离得到一株病毒。此株病毒能凝集鸡的红细胞,并且这种凝集可以被特异性抗血清所抑制。本研究通过血凝和交叉血凝抑制试验、交叉中和试验、空斑试验等方法鉴定分离株的生物学活性,结果表明:该分离株与新城疫病毒(NDV)标准强毒株和标准弱毒株有同源性,但也存在一定的差异。通过最小致死量致死鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雄鸡脑内接种致死指数(ICPI)、6周龄雏鸡静脉接种致病指数(IVPI)等方法测定分离株的毒力,结果表明该分离株为强毒株。通过电镜观察、动物回归试验等方法,最后确定该分离株为新城疫病毒(NDV),并命名为HBG-1株。为了进一步探寻分离株与标准株的异同,又采用RT-PCR方法,扩增获得分离株F_o裂解位点附近的基因片段,经测序后与国际上已发表的新城疫病毒的核酸序列进行比较,结果表明其与标准株和疫苗株之间的同源性较低,仅为82%~86%之间。经系统发育进化树分析后,判定该分离株为新城疫病毒(NDV)基因Ⅶ型。运用计算机软件对其裂解位点处的氨基酸序列进行预测和分析,结果表明该分离株为新城疫病毒强毒株并具有基因Ⅶ型的典型结构特征。


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