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玉米大斑病菌菌丝蛋白单克隆抗体制备

邢继红  
【摘要】: 玉米大斑病菌HT-毒素是引起玉米大斑病的重要毒性因子。前期研究表明,玉米大斑病菌致病的可能机制是HT-毒素与玉米细胞膜上的受体相结合,通过影响细胞膜透性和活性氧的产生引起病害。HT-毒素为低分子量的小分子化合物,利用免疫学技术研究它在寄主玉米细胞膜上的作用位点以及可能的受体蛋白非常困难。本文利用单克隆抗体技术获得了与HT-毒素产生有关的1号小种菌株蛋白的单克隆抗体,从而为研究HT-毒素的产生机制和致病机理奠定基础。 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析0号小种菌株和1号小种菌株的菌丝蛋白发现,在1号小种中存在一条特异性的蛋白质条带。经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定该蛋白质的分子量为25kD。以1号小种99-2菌株产生的25kD蛋白(浓度为173.8μg/mL)为抗原皮下注射分3次免疫6~8周BALB/C小鼠,获得了效价大于1/1600的抗血清。取小鼠的脾脏进行单克隆抗体制备,用间接酶联免疫技术(ELISA)筛选得到12株效价较高的单抗,即Mb1~12。交叉反应试验发现,Mb4与0号小种菌株和除99-2菌株以外的其他1号小种菌株的菌丝蛋白均不发生阳性反应,特异性最强;Mb1、Mb2、Mb3、Mb5、Mb6、Mb10、Nb11只能与1号小种菌株的菌丝蛋白发生阳性反应;Mb7、Mb8、Mb9、Mb12与0号小种和1号小种的菌丝蛋白均可以发生交叉反应。另外,研究还发现,Mb2、Mb3、Mb8和Mb9能与1号小种99-2菌株产生的HT-毒素发生特异性阳性反应。 试验结果表明,0号小种与1号小种不但在HT-毒素组成上有差异,在菌丝蛋白组成上也存在显著区别。从1号小种中分离的特异性菌丝蛋白可能与1号小种HT-毒素中特异性毒素组分HT-Ⅳ产生有关。


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