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梨属(Pyrus L.)植物RAPD反应体系的建立及其应用研究

马艳芝  
【摘要】: 梨为蔷薇科(Rosaceae),梨亚科(Pomoideae)之梨属(Pyrus L.)植物。世界梨属植物约有60余种,分布于欧、亚、北美洲及南半球温带地区。我国是世界梨属植物的起源中心之一,蕴藏的梨属种质资源极为丰富。本研究借助RAPD技术对鸭梨及其9个变异系和其它44个梨属植物进行了DNA水平上的研究,旨在探讨RAPD技术在梨树芽变鉴定中的作用;通过对梨属部分种质进行鉴定和亲缘关系分析,解决例如苹果梨等在分类上存在争议的品种的归属问题,为梨属种质的科学利用和分子标记辅助育种提供参考。本研究取得的主要结果如下: 1.通过系统的比较,反复验证,建立起了梨属植物RAPD分析的优化反应体系,即在25μL的反应体系之中含有100 mM KCl、8 mM (NH_4)_2SO_4、10 mM Tris-HCl(pH9.0)、2.0 mM MgCl_2、200μM dNTP、0.4 μM引物、40ng模板DNA、1.5UTaq DNA聚合酶。经与前人结果进行比较,认为梨属植物RAPD分析的最佳反应条件在不同实验室之间有较强的一致性,只需对引物、Taq DNA聚合酶和Mg~(2+)的用量进行小幅度调整。 2.从50个随机引物中筛选出18个多态性引物,并进行了44个供试梨属植物的RAPD扩增,每个引物扩增出的条带数在4—11之间,扩增出的DNA片段分子量大多在450bp—2000bp之间,共扩增出118个条带,其中样品间相同的条带数有11条,呈现多态性的条带107条,多态百分率达90.8%。 3.首次对9个鸭梨变异类型进行RAPD分析,并初步筛选出4个多态性引物即S28、S32、S176、S1450。研究发现: (1)芽变品种垂枝鸭梨(编号10)与其他类型相比较特异增加了1条条带,即S32-600。 (2)在芽变品种魏县巨鸭梨(编号2)、甜鸭梨(编号8)、垂枝鸭梨(编号10)的扩增产物中均少了2条特异性条带,即S28-400和S28-650。 (3)在芽变品种魏县巨鸭梨(编号2)和阎庄自花结实鸭梨(编号6)的扩增产物中均缺少了2条特异性条带,即S176-900和S176-1150。 (4)引物S1450的扩增产物在供试变异类型中虽未出现多态性,但是芽变品种晋县大鸭梨(编号4)的扩增产物在大约750bp处的条带丰度发生了变化,即晋县大鸭梨S1450-750是1条强带,而其它类型中此条带为1条弱带。 梨属(P))ri’ L.埔物RAPD反应体系的建立及其应用研究 4.对供试44个梨品种资源的RAPD数据结果进行了聚类分析。结果表明,白 梨系统与砂梨系统品种类型首先聚在一起,然后是秋子梨系统,最后与西样梨系统 聚在一起。 5.通过聚类分析和遗传相似系数分析,重点探讨了苹果梨在DNA水平上的分 类地位。认为将苹果梨归为白梨系统比较适宜。 6.通过聚类分析和遗传相似系数分析,探讨了库尔勒香梨在DNA水平上的分 类地位。认为将库尔勒香梨归为白梨系统比较适宣。


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