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桃(Prunus persica (L.)Batsch)果实酸性状的分子标记研究

张学宁  
【摘要】: 桃树是世界上广泛栽植的果树之一。非酸/酸是决定桃果实品质的重要性状,寻找与非酸/酸性状紧密连锁的分子标记对桃树育种具有重要意义。以桃品种京玉(Dd)、美味(dd)及其杂交所得的BC,代69株实生群体为试材,通过AFLP、SCAR、RAPD分子标记技术对果实性状非酸/酸(D/d)进行了分子标记研究。 试验建立了适合桃AFLP分析的技术体系。以CTAB方法提取基因组DNA,去除RNA后作为AFLP分析的模板。将基因组DNA酶切、连接后,将连接产物稀释10倍,用引物组合E+O/M+C进行预扩增。籽预扩增产物稀释20倍用作选择性扩增的模板,选用EcoRI+2/MseI+3、EcoRI+3/MseI+3所组成的128对引物组合进行扩增,扩增条带清晰、多态性高,适合桃基因组分析。 研究以BSA(Bulk Segregation Analysis)法,分别采用6个单株混合,组成非酸利酸两个DNA库。通过对128对AFLP引物组合(附表2)的筛选,发现引物组合E-TA/M-CTC、E-AT/M-CTA和E-ACT/M-CAT扩增出的差异条带在BC_1代群体中符合非酸/酸性状的分离规律;最终获得了3个AFLP标记:E-TA/M-CTC、E-AT/M-CTA筛选到的差异片段与果实性状酸(d)连锁,E-ACT/M-CAT筛选到的差异片段与果实性状非酸(D)连锁。 将差异片段进行回收、克隆及测序分析,结果表明三种引物组合E-TA/M-CTC、E-AT/M-CTA、E-ACT/M-CAT扩增的差异片段分别为140bp、199bp、408bp。根据测序结果设计引物,将199bp片段转化为共显性的SCAR标记。 通过RAPD技术寻找与果实酸性状连锁的分子标记,建立适合桃RAPD分析的体系。由于RAPD标记检山率低,尽管本试验采用两株极端类型筛选大量引物,但未找到与目的基因紧密连锁的分子标记。


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